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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA试剂盒提取完DNA后的问题
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7782663

铜虫 (正式写手)

[求助] DNA试剂盒提取完DNA后的问题

http://www.beyotime.com/d0063.htm 这个是碧云天的试剂盒 它的最后一步实在让我郁闷
                     将DNA纯化柱置于一洁净的1.5ml离心管上，加入50-200微升洗脱液。室温放置1-3分钟。≥12000rpm离心1分钟。所得液体即为纯化得到的总DNA。

他竟然加这么多洗脱液  我们跑电泳的时候才用20微升 跪求这步怎么处理
怎么将200微升变成我要的20微升  求高人指点。

总不能说直接从那个200微升中吸取20微升吧 那这个跑电泳的琼脂糖凝胶上肯定不会有DNA条带的。

[ Last edited by 7782663 on 2013-11-12 at 11:43 ]
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1楼 2013-11-12 11:39:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-13 13:40:52
按试剂盒的说明书操作，一般没有问题，用50-200ul洗脱的话，根据你的预估核酸量加洗脱液，核酸少的话可以用50ul洗脱，再少的话可以预加热洗脱液，还可以50ul洗脱后，再用这洗脱液重复洗脱一次，上样量也不一定要20ul,要看核酸量，你可以定一下量后再上样
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12楼2013-11-13 13:15:26
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普通回帖

710002191

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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7782663: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-13 08:38:56
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-13 12:38:53
不一定呀，这是提取DNA的标准步骤，我们平时就用一点也照常按照那个做的呀，要是样本含量本身可以的话提取的DNA浓度是可以满足要求的，我们实验用两微升也是按那个做的
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may
2楼2013-11-12 13:27:20
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银杏酸酸

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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7782663: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-13 08:39:02
是的啊，用它给的标准洗脱液体积洗脱，用的时候取一些，可多次利用。
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3楼2013-11-12 14:51:35
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
7782663: 金币+1 2013-11-13 08:39:08
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-13 12:38:59
那个不会有影响的，我跑1%琼脂糖电泳时，只取2ul的，我的洗脱液有时是100ul的，就是条带清晰程度问题，注明的50-200，所以，你完全可以用50的，就是跑出来的特别亮。OMEGA的我做的时候是这样的。不过，你上样量有点小多吧？
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轻描淡写，浓墨重彩。
4楼2013-11-12 15:03:12
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7782663

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-11-12 15:03:12
那个不会有影响的，我跑1%琼脂糖电泳时，只取2ul的，我的洗脱液有时是100ul的，就是条带清晰程度问题，注明的50-200，所以，你完全可以用50的，就是跑出来的特别亮。OMEGA的我做的时候是这样的。不过，你上样量有点 ...

我们的梳子 有点小呵呵
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5楼2013-11-13 08:37:47
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7782663

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 银杏酸酸 at 2013-11-12 14:51:35
是的啊，用它给的标准洗脱液体积洗脱，用的时候取一些，可多次利用。

6楼2013-11-13 08:38:01
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-13 12:39:03
肯定的嘛，只要你纯化之前的DNA浓度达标，纯化后取少量电泳肯定没问题的，再说，假如你真只要20u，那后面你操作失误浪费了一个那你是不是还得重新来一次？
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但行好事，莫问前程
7楼2013-11-13 08:50:51
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

优秀区长优秀区长优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 7782663 at 2013-11-13 08:37:47
我们的梳子 有点小呵呵...

是大吧，你的Marker点样多少啊？别说也是20微的，那真就是土豪了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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轻描淡写，浓墨重彩。
8楼2013-11-13 10:34:01
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-13 13:40:36
最后洗脱用多少洗脱液那是依据你的DNA量确定的，多久多加少就少加，不是说他让你加多少就多少。
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9楼2013-11-13 10:35:00
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-13 13:40:42
少了50 μl就覆盖不了离心管底，洗脱效果也不好。
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10楼2013-11-13 11:23:56
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