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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 固氮根瘤菌基因组DNA的提取
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晴微雨浓

铜虫 (初入文坛)

[求助] 固氮根瘤菌基因组DNA的提取

请问有人提取过根瘤菌基因组DNA？如果有的话请问用的是哪家公司的试剂盒？
有没有人用生工的Ezup柱式基因组DNA抽提试剂盒提过？为什么我用它家的试剂盒提的有杂带？
我的菌液是挑取的根瘤菌单克隆。摇菌后用试剂盒提的基因组DNA，而且扩增的nifH基因也有杂带，是因为基因组DNA提的不纯吗？还是因为别的原因？
请有相关知识的童孩们多多指教！！！

这个是提取的固氮菌基因组DNA，不同泳道是不同的克隆



这个是扩增的nifH基因，条带大小是320bp，可是上面有两条杂带，这是什么原因啊？
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1楼 2012-09-19 11:20:48
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zhaoghit

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
晴微雨浓: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-20 09:02:04
不应该是DNA问题，你还要从PCR上找问题，特异性不强造成，扩增出非特异片段，建议修改体系或调整条件，增加特异性扩增
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天道酬勤！
2楼2012-09-20 08:52:40
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晴微雨浓

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoghit at 2012-09-20 08:52:40
不应该是DNA问题，你还要从PCR上找问题，特异性不强造成，扩增出非特异片段，建议修改体系或调整条件，增加特异性扩增

这个出现非特异性扩增的问题，在之前我从土壤中提取细菌基因组DNA，然后进行固氮菌nifH基因的扩增时就一直存在，也没有完全解决。我一直认为是因为我用的是兼并引物。
不知道您有没有对固氮菌nifH基因进行过扩增，所用的引物序列是什么？
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3楼2012-09-20 09:10:07
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zhaoghit

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
晴微雨浓: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-09-21 08:13:15
这个我没扩增过，但是这是比较共性的问题，通过优化体系或者引物上能够解决的，但不建议将DNA纯化，否则会损失生物信息。祝你顺利！
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天道酬勤！
4楼2012-09-20 18:43:05
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晴微雨浓

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhaoghit at 2012-09-20 18:43:05
这个我没扩增过，但是这是比较共性的问题，通过优化体系或者引物上能够解决的，但不建议将DNA纯化，否则会损失生物信息。祝你顺利！

谢谢了哈！！！
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5楼2012-09-21 08:13:41
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云间皎月

新虫 (初入文坛)
我想做土壤微生物DNA和根系内生固氮微生物DNA的提取工作，因为以前没做过，求助哪位高手点播
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6楼2013-01-20 08:34:12
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晴微雨浓

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 云间皎月 at 2013-01-20 08:34:12
我想做土壤微生物DNA和根系内生固氮微生物DNA的提取工作，因为以前没做过，求助哪位高手点播

土壤微生物DNA提取，你可以尝试一下sigma的土壤DNA提取试剂盒，我之前用的是这个，效果还可以吧！
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7楼2013-01-22 13:36:53
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晴微雨浓

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 云间皎月 at 2013-01-20 08:34:12
我想做土壤微生物DNA和根系内生固氮微生物DNA的提取工作，因为以前没做过，求助哪位高手点播

不好意思，说错了，是OMEGA的土壤DNA提取试剂盒~~~
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8楼2013-01-22 19:04:52
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