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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA试剂盒提取完DNA后的问题
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
乙醇沉淀
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11楼2013-11-13 11:24:38
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doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-13 13:40:52
按试剂盒的说明书操作，一般没有问题，用50-200ul洗脱的话，根据你的预估核酸量加洗脱液，核酸少的话可以用50ul洗脱，再少的话可以预加热洗脱液，还可以50ul洗脱后，再用这洗脱液重复洗脱一次，上样量也不一定要20ul,要看核酸量，你可以定一下量后再上样
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12楼2013-11-13 13:15:26
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7782663

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-11-13 10:34:01
是大吧，你的Marker点样多少啊？别说也是20微的，那真就是土豪了。
...

1微升
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13楼2013-11-13 15:07:42
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7782663

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 20093651 at 2013-11-13 08:50:51
肯定的嘛，只要你纯化之前的DNA浓度达标，纯化后取少量电泳肯定没问题的，再说，假如你真只要20u，那后面你操作失误浪费了一个那你是不是还得重新来一次？

我的意思是 估计DNA浓度不达标 因为平时我们最好一步得到液体体积才20微升 去跑胶  而这个最低要50微升少于这个DNA就洗脱不下来了
  我是怕DNA浓度不达标
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14楼2013-11-13 15:11:08
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sometimes898

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-14 23:17:27
你可以根据经验增加或减少洗脱液的量，若是平时提的DNA浓度很高的话，可以适当减少洗脱液，但要以覆盖滤膜为底线
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15楼2013-11-13 15:19:48
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑电泳20μl，太浪费了吧？我们一般加100μl左右，电泳取5μl检测。
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学习使你立于不败之地
16楼2013-11-13 18:27:43
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-14 23:17:38
现在试剂盒中的柱子一般最多可以挂20微克的DNA，所以，他们说的洗脱液的量是一个范围，如果你感觉你所提取的DNA较多，就用较多的洗脱液洗脱。反之，就用较少的洗脱液洗脱，但一般最少不能少于20微升。
另外，你跑胶的目的是什么，如果是检测，几微升就够了。
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转向地质微生物学
17楼2013-11-14 19:48:22
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kennyhas

铜虫 (小有名气)
楼主，你太欢乐了， 刚进实验室的时候我干过最菜鸟的事也就是拿5-6ul跑胶， 你这一上来就用20ul
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18楼2013-11-17 20:45:50
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