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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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7782663

铜虫 (正式写手)

[求助] DNA试剂盒提取完DNA后的问题

http://www.beyotime.com/d0063.htm 这个是碧云天的试剂盒 它的最后一步实在让我郁闷
                     将DNA纯化柱置于一洁净的1.5ml离心管上,加入50-200微升洗脱液。室温放置1-3分钟。≥12000rpm离心1分钟。所得液体即为纯化得到的总DNA。

他竟然加这么多洗脱液  我们跑电泳的时候才用20微升 跪求这步怎么处理
怎么将200微升变成我要的20微升  求高人指点。

总不能说直接从那个200微升中吸取20微升吧 那这个跑电泳的琼脂糖凝胶上肯定不会有DNA条带的。

[ Last edited by 7782663 on 2013-11-12 at 11:43 ]
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doglet

银虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-13 13:40:52
按试剂盒的说明书操作,一般没有问题,用50-200ul洗脱的话,根据你的预估核酸量加洗脱液,核酸少的话可以用50ul洗脱,再少的话可以预加热洗脱液,还可以50ul洗脱后,再用这洗脱液重复洗脱一次,上样量也不一定要20ul,要看核酸量,你可以定一下量后再上样
12楼2013-11-13 13:15:26
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普通回帖

710002191

银虫 (小有名气)

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7782663: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-13 08:38:56
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-13 12:38:53
不一定呀,这是提取DNA的标准步骤,我们平时就用一点也照常按照那个做的呀,要是样本含量本身可以的话提取的DNA浓度是可以满足要求的,我们实验用两微升也是按那个做的
may
2楼2013-11-12 13:27:20
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银杏酸酸

银虫 (小有名气)

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7782663: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-13 08:39:02
是的啊,用它给的标准洗脱液体积洗脱,用的时候取一些,可多次利用。
3楼2013-11-12 14:51:35
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

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7782663: 金币+1 2013-11-13 08:39:08
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-13 12:38:59
那个不会有影响的,我跑1%琼脂糖电泳时,只取2ul的,我的洗脱液有时是100ul的,就是条带清晰程度问题,注明的50-200,所以,你完全可以用50的,就是跑出来的特别亮。OMEGA的我做的时候是这样的。不过,你上样量有点小多吧?
轻描淡写,浓墨重彩。
4楼2013-11-12 15:03:12
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7782663

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 梧桐柒夕 at 2013-11-12 15:03:12
那个不会有影响的,我跑1%琼脂糖电泳时,只取2ul的,我的洗脱液有时是100ul的,就是条带清晰程度问题,注明的50-200,所以,你完全可以用50的,就是跑出来的特别亮。OMEGA的我做的时候是这样的。不过,你上样量有点 ...

我们的梳子 有点小呵呵
5楼2013-11-13 08:37:47
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7782663

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 银杏酸酸 at 2013-11-12 14:51:35
是的啊,用它给的标准洗脱液体积洗脱,用的时候取一些,可多次利用。

6楼2013-11-13 08:38:01
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-13 12:39:03
肯定的嘛,只要你纯化之前的DNA浓度达标,纯化后取少量电泳肯定没问题的,再说,假如你真只要20u,那后面你操作失误浪费了一个那你是不是还得重新来一次?
但行好事,莫问前程
7楼2013-11-13 08:50:51
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梧桐柒夕

主管区长 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 7782663 at 2013-11-13 08:37:47
我们的梳子 有点小呵呵...

是大吧,你的Marker点样多少啊?别说也是20微的,那真就是土豪了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
轻描淡写,浓墨重彩。
8楼2013-11-13 10:34:01
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-13 13:40:36
最后洗脱用多少洗脱液那是依据你的DNA量确定的,多久多加少就少加,不是说他让你加多少就多少。
9楼2013-11-13 10:35:00
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-13 13:40:42
少了50 μl就覆盖不了离心管底,洗脱效果也不好。
10楼2013-11-13 11:23:56
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