24小时热门版块排行榜

返回列表

美丽的家园

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1736.7
散金: 30
红花: 1
帖子: 690
在线: 182.8小时
虫号: 2090883
注册: 2012-10-28
专业: 环境分析化学

[求助] 放线菌DNA 提取不出来，第一次做这方面的，没经验，还望指正

???:
a. ??TE??????????????????Σ???????1000 ??L TE????????????12,000 r/min????2 min???????壬???l?κ???????200 ??L TE?????????;
b. ????100  ??L????(10 mg/mL TE???)?????У?36?????30 min????????????30 min;
c. ????20  ??L?????K(5 mg/mL????)??55?????2 h?????????30 min;
d. ????150 ??L10% SDS??65?????30 min?????????30 min;
e. ??????????????/??????????12,000 r/min????5 min????????壬??????;
f. ????????????????????12,000 r/min????5 min?????????;
g. ????0.1?? 3M NaAc???????????2???????????é?20?? 30 min??12,000 r/min????5 min??????;
h. 75%??????2??3?Σ?????????20 ??LTE???DNA??4?汣?档
????????????????????????????????????????????20-30 ??L????????DNA?????????????????????????????????????DNA?????????????????????????????Σ??????????????

???????SDS???η???SDS????20?? 500??L ,0.5 mol/L EDTA  l??????????????;5mol/L NaCl 100 ??L ??2??CTAB/NaCl 80 ??L ????,??????????????DNA????????????а????????????????????20??SDS?м?NaAc?????????????????????????????????SDS???SDS????DNA?γ????????????Σ?????????????????DNA ?????????.SDS???????????????????????

?й?????????ó?????????????????Ч???????Щ???

回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

美丽的家园

» 猜你喜欢

垃圾破二本职称评审标准已经有18人回复
职称评审没过，求安慰已经有53人回复
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦已经有5人回复
26申博自荐已经有3人回复
A期刊撤稿已经有4人回复
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿已经有22人回复
EST投稿状态问题已经有7人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？已经有19人回复
有关基因组提取问题已经有19人回复
大家来说说做southern blot时，基因组DNA的提取方法已经有39人回复
揪心的菌落PCR 已经有16人回复
放线菌DNA的提取已经有4人回复
DNA提取时用到的酚是什么酚？怎么配置？已经有22人回复
细菌基因组DNA电泳图谱已经有6人回复
细菌基因组DNA提取交流已经有18人回复
怎样比较完全地提取土壤中的微生物？已经有15人回复
全血基因组的提取问题已经有6人回复
基因组提取过程中加入溶菌酶有白色沉淀已经有13人回复
细菌全基因组提取求助已经有7人回复
放线菌基因组DNA提取已经有6人回复
放线菌基因组DNA提取后，用TE不溶！！？已经有20人回复
【求助/交流】提取的DNA在-20℃下保存后，怎样解冻？已经有31人回复
【求助/交流】提取DNA总提不出来已经有23人回复
【求助/交流】有没有人做过用水煮法提取DNA的啊，望赐教已经有21人回复
【求助】第一次做微生物实验，请问具塞磨口试管塞上塞子灭菌，会不会爆炸？谢谢！已经有7人回复

1楼 2013-08-16 17:35:57

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

应助: 42 (小学生)
金币: 3175.9
散金: 1032
红花: 4
帖子: 542
在线: 57.3小时
虫号: 1485167
注册: 2011-11-10
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
美丽的家园: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-08-17 09:40:31

酶解法就行了。
如果是少量提取，你溶菌酶37℃放置1小时;大量提取最好37℃摇床上震荡3小时左右，不要怕弄断DNA。
你溶菌酶处理后要看见菌体溶解再往下做。
PK不用2h的，30min也行。
别的操作大体都行，推荐你看一下《一种简单有效的适于PCR操作的放线菌DNA提取方法》这篇文献，可以自己适当修改。
还有少量提取的时侯，除非菌体酶解很彻底，一般看不见DNA，但是溶解在35ul TE中PCR加0.8ul左右当模板没问题。

赞一下

回复此楼

2楼2013-08-17 00:26:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

美丽的家园

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1736.7
散金: 30
红花: 1
帖子: 690
在线: 182.8小时
虫号: 2090883
注册: 2012-10-28
专业: 环境分析化学

引用回帖:

2楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2013-08-17 00:26:26
酶解法就行了。
如果是少量提取，你溶菌酶37℃放置1小时;大量提取最好37℃摇床上震荡3小时左右，不要怕弄断DNA。
你溶菌酶处理后要看见菌体溶解再往下做。
PK不用2h的，30min也行。
别的操作大体都行，推荐你看 ...

少量提取，看不见DNA,怎么判断有没有呢？没有的话，后续步骤岂不没意义

赞一下

回复此楼

3楼2013-08-17 09:43:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖