应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 放线菌DNA 提取不出来，第一次做这方面的，没经验，还望指正
201/2返回列表12下一页
查看: 2795  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

美丽的家园

金虫 (正式写手)

[求助] 放线菌DNA 提取不出来，第一次做这方面的，没经验，还望指正

???:
a. ??TE??????????????????Σ???????1000 ??L TE????????????12,000   r/min????2 min???????壬???l?κ???????200 ??L TE?????????;
b. ????100  ??L????(10 mg/mL TE???)?????У?36?????30 min????????????30 min;
c. ????20  ??L?????K(5 mg/mL????)??55?????2 h?????????30 min;
d. ????150 ??L10% SDS??65?????30 min?????????30 min;
e. ??????????????/??????????12,000 r/min????5 min????????壬??????;
f. ????????????????????12,000 r/min????5 min?????????;
g. ????0.1?? 3M NaAc???????????2???????????é?20?? 30 min??12,000 r/min????5 min??????;
h. 75%??????2??3?Σ?????????20 ??LTE???DNA??4?汣?档
????????????????????????????????????????????20-30 ??L????????DNA?????????????????????????????????????DNA?????????????????????????????Σ??????????????

???????SDS???η???SDS????20?? 500??L ,0.5 mol/L EDTA  l??????????????;5mol/L NaCl 100 ??L ??2??CTAB/NaCl 80 ??L ????,??????????????DNA????????????а????????????????????20??SDS?м?NaAc?????????????????????????????????SDS???SDS????DNA?γ????????????Σ?????????????????DNA ?????????.SDS???????????????????????

?й?????????ó?????????????????Ч???????Щ???
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

美丽的家园

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-16 17:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
美丽的家园: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-08-17 09:40:31
酶解法就行了。
如果是少量提取，你溶菌酶37℃放置1小时;大量提取最好37℃摇床上震荡3小时左右，不要怕弄断DNA。
你溶菌酶处理后要看见菌体溶解再往下做。
PK不用2h的，30min也行。
别的操作大体都行，推荐你看一下《一种简单有效的适于PCR操作的放线菌DNA提取方法》这篇文献，可以自己适当修改。
还有少量提取的时侯，除非菌体酶解很彻底，一般看不见DNA，但是溶解在35ul TE中PCR加0.8ul左右当模板没问题。
赞一下 回复此楼
2楼2013-08-17 00:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

美丽的家园

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2013-08-17 00:26:26
酶解法就行了。
如果是少量提取，你溶菌酶37℃放置1小时;大量提取最好37℃摇床上震荡3小时左右，不要怕弄断DNA。
你溶菌酶处理后要看见菌体溶解再往下做。
PK不用2h的，30min也行。
别的操作大体都行，推荐你看 ...

少量提取，看不见DNA,怎么判断有没有呢？没有的话，后续步骤岂不没意义
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-17 09:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzx018

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
美丽的家园: 金币+5 2013-08-17 11:32:39
美丽的家园: 金币+2 2013-08-18 11:07:56
我们用的是试剂盒，专门适用格兰氏阳性菌的，比一般的试剂盒效果好出不少，但是分成各步不知道是哪一步改变较大，你查阅下相关文献

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-17 11:09:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
美丽的家园: 金币+3 2013-08-18 11:08:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-08-17 09:43:58
少量提取，看不见DNA,怎么判断有没有呢？没有的话，后续步骤岂不没意义...

你PCR试一下就知道了。
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-18 00:29:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

美丽的家园

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2013-08-18 00:29:46
你PCR试一下就知道了。...

浪费时间、耗药品  没有其他办法了吗？
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-18 11:07:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

美丽的家园

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xzx018 at 2013-08-17 11:09:00
我们用的是试剂盒，专门适用格兰氏阳性菌的，比一般的试剂盒效果好出不少，但是分成各步不知道是哪一步改变较大，你查阅下相关文献

是什么试剂盒?
回复此楼
7楼2013-08-18 11:09:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xzx018

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-08-18 11:09:10
是什么试剂盒?...

庄盟试剂的革兰氏阳性的基因组试剂盒，具体名字和型号不记得了。纺线菌基因组GC含量较高，PCR时加一定量的DMSO有奇效

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
8楼2013-08-18 13:52:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小小亚杰

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-08-18 11:07:23
浪费时间、耗药品  没有其他办法了吗？...

有微量测定仪么？测一下OD值和DNA含量。
你后续步骤要做什么了？你只需要PCR一次就知道按这个方法能提出来，以后就这样操作就行了吧
赞一下 回复此楼
9楼2013-08-19 00:23:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lmhzy1987

金虫 (正式写手)
溶菌酶处理时间太短了，过夜没问题，可以用细胞破碎仪打一下效果更好，菌体稍微多点
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

美丽的家园
头疼的文库
10楼2013-08-19 12:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 美丽的家园 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？ +5 瞬息宇宙 2026-02-15 6/300 2026-02-18 12:51 by 月下雪林
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:08 by lotyj5cz79
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 3/150 2026-02-18 06:53 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 00:23 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错，点赞！ +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[微米和纳米] 球磨粉体时遇到了大的问题，请指教！ 10+3 6sbiam 2026-02-12 15/750 2026-02-16 15:03 by tgzxzqj
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭