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美丽的家园

金虫 (正式写手)

送红花一朵
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10?: Originally posted by lmhzy1987 at 2013-08-19 12:59:00
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加溶???酶过夜处???我试了,没什么???化,超声波20min.还是一样,?????也太厚了,裂解至??明,真看??出。没有细胞破碎仪,能???研磨?

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11楼2013-08-19 15:39:28
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czllxm

新虫 (初入文坛)

模板只是用来做PCR吗?
12楼2013-08-19 17:43:06
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lmhzy1987 at 2013-08-19 12:59:00
溶菌酶处理时间太短了,过夜没问题,可以用细胞破碎仪打一下效果更好,菌体稍微多点

溶菌酶过夜并且放在摇床60 r/min,第二天变化不大,我就用超声波处理20 min,菌体仍旧无法裂解到透明,后面就SDS 60℃放置90 min,随后室温30 min;菌壁还是无法裂解,实在是太厚。没有细胞破碎仪,能否把菌体过滤、烘干、低温研磨,像提真菌那样提取呢?
13楼2013-08-19 18:52:33
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by czllxm at 2013-08-19 17:43:06
模板只是用来做PCR吗?

鉴定放线菌,跑PCR模版不纯,后期回收DNA影响是不是很大呢?
14楼2013-08-20 00:14:49
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lmhzy1987

金虫 (正式写手)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-08-19 18:52:33
溶菌酶过夜并且放在摇床60 r/min,第二天变化不大,我就用超声波处理20 min,菌体仍旧无法裂解到透明,后面就SDS 60℃放置90 min,随后室温30 min;菌壁还是无法裂解,实在是太厚。没有细胞破碎仪,能否把菌体过滤、烘 ...

菌体不用裂解到透明,SDS终浓度2%,不用采取过滤、烘干,你的除非是稀有放线菌,不然不会那么难提,菌体最好新鲜些
头疼的文库
15楼2013-08-20 11:49:47
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

引用回帖:
15楼: Originally posted by lmhzy1987 at 2013-08-20 11:49:47
菌体不用裂解到透明,SDS终浓度2%,不用采取过滤、烘干,你的除非是稀有放线菌,不然不会那么难提,菌体最好新鲜些...

采样点保护比较好,稀有放线菌也许吧,菌体是新鲜的,针对稀有放线菌有没有什么比较好的方法?加乙醇留沉淀,离心、是可以看到微量白色沉淀,但不溶于TE,琼脂糖电泳也检测不出,很有能是杂质,不知道有没有必要跑一下PCR再检测
16楼2013-08-20 22:40:55
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yanyan120

银虫 (小有名气)

提取dna,听着都好复杂哦。。。祝楼主好运。。
共勉共勉。
17楼2013-08-21 08:12:35
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美丽的家园

金虫 (正式写手)

送红花一朵
多谢
18楼2013-08-22 17:37:12
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琴音

新虫 (小有名气)

引用回帖:
18楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-08-22 17:37:12
多谢

我也做过放线菌的鉴定,微波发还行的。简单,快速,成本低。
19楼2013-08-24 11:01:04
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181587941

金虫 (正式写手)

我怀疑楼主做的极端放线菌。我以前做过,发现很多放线菌,尤其是极端放线菌是抗溶菌酶的,因此用溶菌酶是不行的。建议用液氮研磨破碎,保证能提出来
20楼2013-08-24 20:14:22
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