放线菌DNA 提取不出来，第一次做这方面的，没经验，还望指正 - 微生物 - 实验/技术

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送红花一朵

???????:

10?: Originally posted by lmhzy1987 at 2013-08-19 12:59:00
????????????????????????????????????????????Ч?????????????????

加溶???酶过夜处???我试了，没什么???化，超声波20min.还是一样，?????也太厚了，裂解至??明，真看??出。没有细胞破碎仪，能???研磨？

[ ????С??????? ]

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11楼2013-08-19 15:39:28

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czllxm

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模板只是用来做PCR吗？

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12楼2013-08-19 17:43:06

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10楼: Originally posted by lmhzy1987 at 2013-08-19 12:59:00
溶菌酶处理时间太短了，过夜没问题，可以用细胞破碎仪打一下效果更好，菌体稍微多点

溶菌酶过夜并且放在摇床60 r/min,第二天变化不大，我就用超声波处理20 min,菌体仍旧无法裂解到透明，后面就SDS 60℃放置90 min，随后室温30 min;菌壁还是无法裂解，实在是太厚。没有细胞破碎仪，能否把菌体过滤、烘干、低温研磨，像提真菌那样提取呢？

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13楼2013-08-19 18:52:33

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12楼: Originally posted by czllxm at 2013-08-19 17:43:06
模板只是用来做PCR吗？

鉴定放线菌，跑PCR模版不纯，后期回收DNA影响是不是很大呢？

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14楼2013-08-20 00:14:49

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lmhzy1987

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13楼: Originally posted by 美丽的家园 at 2013-08-19 18:52:33
溶菌酶过夜并且放在摇床60 r/min,第二天变化不大，我就用超声波处理20 min,菌体仍旧无法裂解到透明，后面就SDS 60℃放置90 min，随后室温30 min;菌壁还是无法裂解，实在是太厚。没有细胞破碎仪，能否把菌体过滤、烘 ...

菌体不用裂解到透明，SDS终浓度2%，不用采取过滤、烘干，你的除非是稀有放线菌，不然不会那么难提，菌体最好新鲜些

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