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zlkstone

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[求助] 放线菌DNA的提取

提取放线菌DNA时应注意什么，为什么我老提取不出来，愁死了。。。谢谢大家。

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1楼 2012-05-23 15:33:11

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【答案】应助回帖

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rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-05-31 22:44:43

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3368854&page=1#pid1969860

如果提取不出来就按照真菌的提取方法。真菌的液体培养物菌丝有点纠结，有点像真菌，而且细胞壁也硬一些，我用这个方法提取过。

2.2.5.2.1真菌总DNA的提取
（1）接种菌株至液体培养基中，28 ℃，180 rpm振荡培养3天；
（2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体；
（3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状；
（4）将粉末移至1.5 mL的EP管中，加入600 微升真菌提取液；
（5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000 rpm离心10min；
（6）取500微升上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）；
（7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30 min；
（8）10000 rpm 离心10min，沉淀物用75%乙醇洗2次后真空干燥；
（9）以20微升 1×TE 溶解沉淀物；
（10）电泳检测总DNA的浓度。