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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 放线菌DNA的提取
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zlkstone

新虫 (初入文坛)

[求助] 放线菌DNA的提取

提取放线菌DNA时应注意什么，为什么我老提取不出来，愁死了。。。谢谢大家。
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1楼 2012-05-23 15:33:11
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yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-23 21:25:46
zlkstone: 金币+1 2012-08-14 14:58:51
不知道你是用什么提的。我一般用菌丝，首先确保菌丝体没有染菌。
1.破壁的过程要确保细胞壁破碎！无论你是用液氮还是用酶解。
2.接下来就是蛋白酶作用，在第一步成功后最好作用2h。（注意加完后轻轻混匀）
3.接下来就是等待，然后析出过程了，按步骤做就可以。
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低调做人好么~~
2楼2012-05-23 19:30:34
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laneldarye

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-31 22:44:34
按阳性菌抽提方法，溶菌酶37度过夜，另用CTAB法手工或者Qiagen kit
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3楼2012-05-30 00:37:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander: 金币+5, MicEPI+1, 鼓励交流 2012-05-31 22:44:43
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3368854&page=1#pid1969860

如果提取不出来就按照真菌的提取方法。真菌的液体培养物菌丝有点纠结，有点像真菌，而且细胞壁也硬一些，我用这个方法提取过。

2.2.5.2.1真菌总DNA的提取
（1）接种菌株至液体培养基中，28 ℃，180 rpm振荡培养3天；
（2）用灭菌纱布过滤，并压干菌体；
（3）将菌丝体倒入研钵（灭菌并预冷），迅速倒入液氮，研磨至粉末状；
（4）将粉末移至1.5 mL的EP管中，加入600 微升真菌提取液；
（5）加等体积苯酚/氯仿，轻轻倒转混合，10000 rpm离心10min；
（6）取500微升上清液移入新的1.5mlLEP管，重复步骤（5）；
（7）取上清液，加入两倍体积无水乙醇，-20℃放置30 min；
（8）10000 rpm 离心10min，沉淀物用75%乙醇洗2次后真空干燥；
（9）以20微升 1×TE 溶解沉淀物；
（10）电泳检测总DNA的浓度。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2012-05-30 05:28:33
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
（5）DNA抽提液的配置
表 2-5  DNA抽提液的配置
Table 2-5 The component of DNA distilling buffer
成分        浓度
NaCl        200mmol/L
EDTA-Na2        4mmol/L
SDS        2%
Tris-HCl(pH=8.0)        100mmol/L
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-05-30 05:29:26
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