应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关基因组提取问题
202/2返回列表上一页12
查看: 2622  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mqs123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hraikeyan: 金币+2 2012-11-20 12:02:17
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-11-20 17:15:19
我的也是革兰氏阳性菌建库，提取的基因组质量还可以，提取的步骤和你的不同，蛋白酶K 一般55度作用时间是一个小时，时间太短，消化的不是很好，然后加入10%SDS，用酚氯仿和氯仿抽提，在加入异丙醇沉淀。5ml的菌液离心，加入40ul溶菌酶，加多了反而不好，你可以根据反应情况看看，再决定是否添加点。链霉菌的孢子比较难破壁，收集的菌体也比较少。
赞一下 回复此楼
11楼2012-11-19 21:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:37:47
我的也是革兰氏阳性菌建库，提取的基因组质量还可以，提取的步骤和你的不同，蛋白酶K 一般55度作用时间是一个小时，时间太短，消化的不是很好，然后加入10%SDS，用酚氯仿和氯仿抽提，在加入异丙醇沉淀。5ml的菌液离 ...

你的10%的SDS是在蛋白酶K处理1h后，再加的吗？还是和蛋白酶K一起加入？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
12楼2012-11-20 12:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:37:47
我的也是革兰氏阳性菌建库，提取的基因组质量还可以，提取的步骤和你的不同，蛋白酶K 一般55度作用时间是一个小时，时间太短，消化的不是很好，然后加入10%SDS，用酚氯仿和氯仿抽提，在加入异丙醇沉淀。5ml的菌液离 ...

能把你们的具体步骤传给我吗？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
13楼2012-11-20 19:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:37:47
我的也是革兰氏阳性菌建库，提取的基因组质量还可以，提取的步骤和你的不同，蛋白酶K 一般55度作用时间是一个小时，时间太短，消化的不是很好，然后加入10%SDS，用酚氯仿和氯仿抽提，在加入异丙醇沉淀。5ml的菌液离 ...

能把你的具体步骤传上来吗？我用我的方法一直提不出来，想参考一下你的。
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
14楼2012-11-21 09:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mqs123

金虫 (初入文坛)
先加蛋白酶K,55度消化一段时间，在加入SDS，继续反映
赞一下 回复此楼
15楼2012-11-22 13:53:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mqs123

金虫 (初入文坛)
用的盐析法，链霉菌提基因组的方法，链霉菌也是革兰氏阳性菌，在这个方法上调节了溶菌酶和蛋白酶K的量和时间，每个菌不同，加的量也有相应的区别
赞一下 回复此楼
16楼2012-11-22 14:00:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mqs123

金虫 (初入文坛)
而且你的菌收集最好在对数生长期，不要长的时间太长，到后期会产生很多代谢产物，干扰基因组的提取。
赞一下 回复此楼
17楼2012-11-22 14:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-22 14:00:33
用的盐析法，链霉菌提基因组的方法，链霉菌也是革兰氏阳性菌，在这个方法上调节了溶菌酶和蛋白酶K的量和时间，每个菌不同，加的量也有相应的区别

你是离心多少毫升的菌液，才够建基因组的？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
18楼2012-11-22 22:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mqs123

金虫 (初入文坛)
离心后剩大概收集100UL的菌体。
赞一下 回复此楼
19楼2012-11-23 08:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

野草99688

银虫 (小有名气)
我个人认为！是你加的异戊醇的体积有问题！本人以前也做过。2.5倍体积沉淀，这个量不能少！或者这步省掉，离心后用等体积氯仿异戊醇抽提，去除蛋白后，直接沉淀，你可以试试！
赞一下 回复此楼
20楼2013-03-20 09:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hraikeyan 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 15/750 2026-11-06 13:49 by BkA9Bi5cMhkD
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 17/850 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 18/900 2026-11-06 13:36 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭