应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关基因组提取问题
202/2返回列表上一页12
查看: 1787  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mqs123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hraikeyan: 金币+2 2012-11-20 12:02:17
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-11-20 17:15:19
我的也是革兰氏阳性菌建库，提取的基因组质量还可以，提取的步骤和你的不同，蛋白酶K 一般55度作用时间是一个小时，时间太短，消化的不是很好，然后加入10%SDS，用酚氯仿和氯仿抽提，在加入异丙醇沉淀。5ml的菌液离心，加入40ul溶菌酶，加多了反而不好，你可以根据反应情况看看，再决定是否添加点。链霉菌的孢子比较难破壁，收集的菌体也比较少。
赞一下 回复此楼
11楼2012-11-19 21:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:37:47
我的也是革兰氏阳性菌建库，提取的基因组质量还可以，提取的步骤和你的不同，蛋白酶K 一般55度作用时间是一个小时，时间太短，消化的不是很好，然后加入10%SDS，用酚氯仿和氯仿抽提，在加入异丙醇沉淀。5ml的菌液离 ...

你的10%的SDS是在蛋白酶K处理1h后，再加的吗？还是和蛋白酶K一起加入？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
12楼2012-11-20 12:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:37:47
我的也是革兰氏阳性菌建库，提取的基因组质量还可以，提取的步骤和你的不同，蛋白酶K 一般55度作用时间是一个小时，时间太短，消化的不是很好，然后加入10%SDS，用酚氯仿和氯仿抽提，在加入异丙醇沉淀。5ml的菌液离 ...

能把你们的具体步骤传给我吗？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
13楼2012-11-20 19:40:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-19 21:37:47
我的也是革兰氏阳性菌建库，提取的基因组质量还可以，提取的步骤和你的不同，蛋白酶K 一般55度作用时间是一个小时，时间太短，消化的不是很好，然后加入10%SDS，用酚氯仿和氯仿抽提，在加入异丙醇沉淀。5ml的菌液离 ...

能把你的具体步骤传上来吗？我用我的方法一直提不出来，想参考一下你的。
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
14楼2012-11-21 09:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mqs123

金虫 (初入文坛)
先加蛋白酶K,55度消化一段时间，在加入SDS，继续反映
赞一下 回复此楼
15楼2012-11-22 13:53:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mqs123

金虫 (初入文坛)
用的盐析法，链霉菌提基因组的方法，链霉菌也是革兰氏阳性菌，在这个方法上调节了溶菌酶和蛋白酶K的量和时间，每个菌不同，加的量也有相应的区别
赞一下 回复此楼
16楼2012-11-22 14:00:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mqs123

金虫 (初入文坛)
而且你的菌收集最好在对数生长期，不要长的时间太长，到后期会产生很多代谢产物，干扰基因组的提取。
赞一下 回复此楼
17楼2012-11-22 14:05:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by mqs123 at 2012-11-22 14:00:33
用的盐析法，链霉菌提基因组的方法，链霉菌也是革兰氏阳性菌，在这个方法上调节了溶菌酶和蛋白酶K的量和时间，每个菌不同，加的量也有相应的区别

你是离心多少毫升的菌液，才够建基因组的？
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
18楼2012-11-22 22:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mqs123

金虫 (初入文坛)
离心后剩大概收集100UL的菌体。
赞一下 回复此楼
19楼2012-11-23 08:27:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

野草99688

银虫 (小有名气)
我个人认为！是你加的异戊醇的体积有问题！本人以前也做过。2.5倍体积沉淀，这个量不能少！或者这步省掉，离心后用等体积氯仿异戊醇抽提，去除蛋白后，直接沉淀，你可以试试！
赞一下 回复此楼
20楼2013-03-20 09:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hraikeyan 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学调剂0703 +7 啊我我的 2026-03-11 7/350 2026-03-15 23:03 by 凌千颂111
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +3 腻腻gk 2026-03-14 3/150 2026-03-15 17:28 by 小物理化学
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 283求调剂 +6 小楼。 2026-03-12 9/450 2026-03-14 22:15 by cfxczx2015
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +11 enenenhui 2026-03-13 12/600 2026-03-14 21:48 by laoshidan
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 材料与化工 一志愿山大 321分 求调剂 +7 每天散步 2026-03-09 8/400 2026-03-14 02:18 by JourneyLucky
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 求调剂 +5 一定有学上- 2026-03-12 5/250 2026-03-13 18:31 by ms629
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 285求调剂 +4 ytter 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:48 by jxchenghu
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭