应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌用什么破碎会比较好呢
151/2返回列表12下一页
查看: 1918  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

kabuqinuo89

新虫 (小有名气)

[求助] 细菌用什么破碎会比较好呢

我进行试验的细菌基因组的长度大约是23kb，用什么方法破碎可以使其长度变成大月2000-3000bp左右的呢
求高手帮忙，万分感谢啊！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-27 10:09:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用超声破碎或者高压匀质机破碎应该能破开吧。
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-28 10:31:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用超声波可以打碎，我的一个师姐就是这样碎大肠杆菌的
赞一下 回复此楼
任重道远……
3楼2012-05-28 12:48:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aixia5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
超声和高压都可以，高压后再超声打断核酸
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-28 14:01:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunocn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
破碎可以直接破DNA么？
一般可以用酶切，然后电泳回收
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-28 17:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingdejun

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哦 2012-05-29 13:49:29
kabuqinuo89: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-31 12:56:23
笼统的说，有三类方法。
物理法：用机械力破坏基因组。
化学法：用一些有机试剂来使基因组破坏。
生物法：一般常用的是酶法。

物理法的效果不是很好，获得的片段大小不易控制，且多有损失；
化学法一般都有毒性，并且后期还要较为复杂的后处理；
酶法条件温和，获得的片段大小一般可以提前预知，但是仅限于基因组的结构（或是酶切位点分布）清楚的情况。后处理也比较简单。也可以多个酶同时酶切（注意buffer）。

我个人建议使用酶切法。因为要求不是很严格的话，即便是不清楚酶切位点分布，还是一样可以切，切完之后电泳检测就ok了。若还为达到要求，就继续切。但是最后能否使片段都在2000-3000的范围，我就不能保证了。

当然，你也可以将几种方法结合起来用。效果说不定更好。
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-29 08:57:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

★
kabuqinuo89: 金币+1 2012-05-31 12:58:06
超声的方法基因组就全被破坏了，我破碎细菌菌体获得蛋白时用的超声的方法，看不到核酸了——核酸的粘度较大，所以最好不要用超声了吧
赞一下 回复此楼
没有梦就走，没有错就不向谁低头
7楼2012-05-30 13:40:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kabuqinuo89

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by dongniaoxin at 2012-05-30 13:40:07
超声的方法基因组就全被破坏了，我破碎细菌菌体获得蛋白时用的超声的方法，看不到核酸了——核酸的粘度较大，所以最好不要用超声了吧

那用什么好呢
回复此楼
8楼2012-05-31 12:52:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kabuqinuo89

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by aixia5 at 2012-05-28 14:01:01
超声和高压都可以，高压后再超声打断核酸

超生后效果很不好，都成了100bp左右的片段了
赞一下 回复此楼
9楼2012-05-31 12:54:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kabuqinuo89

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yunocn at 2012-05-28 17:28:25
破碎可以直接破DNA么？
一般可以用酶切，然后电泳回收

酶切也切得个乱七八糟的
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-31 12:54:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kabuqinuo89 的主题更新
151/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自科面上基金字体 +5 iwuli 2026-03-12 6/300 2026-03-16 13:13 by Kamiu_MK
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 环境工程调剂 +3 大可digkids 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:09 by DDDddddmm
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 一志愿西南交大，材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 研究生招生 +3 徐海涛11 2026-03-10 7/350 2026-03-12 14:26 by 徐海涛11
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
[考研] 294 英二数二物化 求调剂 +6 米饭团不好吃 2026-03-09 6/300 2026-03-09 23:55 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭