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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 溶菌酶制备及如何破碎细菌细胞壁
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fannyzehong

银虫 (初入文坛)

[求助] 溶菌酶制备及如何破碎细菌细胞壁

老师要我用溶菌酶破碎细胞壁，显微观察无细胞壁的细菌内部结构等等。请教下，这样的溶菌酶怎么配制？浓度？破碎细胞壁的步骤？越详细越好，谢谢了！
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1楼 2012-02-28 08:08:08
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j2

木虫 (正式写手)
没做过，不知道跟革兰氏阳性菌提取基因的第一步是不是一样的
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
2楼2012-02-28 11:11:04
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fannyzehong

银虫 (初入文坛)
我从没涉及到这个领域，以前是做组培的。就是想问问溶菌酶是怎么配制的？有人说用水或PBS缓冲液或Tris-HCl。有冰浴也有37°温浴。所以我很糊涂，不知道怎么办。我的目的很简单，就是要把细菌细胞壁破碎了就好。急啊，请大家帮帮我。不甚感激
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3楼2012-02-28 14:49:33
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j2

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fannyzehong at 2012-02-28 14:49:33:
我从没涉及到这个领域，以前是做组培的。就是想问问溶菌酶是怎么配制的？有人说用水或PBS缓冲液或Tris-HCl。有冰浴也有37°温浴。所以我很糊涂，不知道怎么办。我的目的很简单，就是要把细菌细胞壁破碎了就好。急 ...

溶菌酶用水或PBS缓冲液或Tris-HCl都可以啊，我一般用灭菌水，懒得配制缓冲液
水浴37°C半小时
不知道行不行···还望楼主做出了了分享一下啊
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
4楼2012-02-29 09:46:36
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fannyzehong: 金币+5 2012-03-31 11:02:54
fannyzehong: 金币+5 2012-03-31 11:04:35
我用溶菌酶做过大肠杆菌破壁（用于纯化蛋白）。当时用的浓度是4mg/mL，buffer是50mM Tris-HCl（pH 8.0），50mM Glucose，1mM EDTA，室温放置15分钟。
你想制备原生质体，可能buffer的渗透压要注意点，去壁的时候可以隔一段时间取一点来镜检。
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何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
5楼2012-02-29 10:29:43
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hongqifei at 2012-02-29 10:29:43
我用溶菌酶做过大肠杆菌破壁（用于纯化蛋白）。当时用的浓度是4mg/mL，buffer是50mM Tris-HCl（pH 8.0），50mM Glucose，1mM EDTA，室温放置15分钟。
你想制备原生质体，可能buffer的渗透压要注意点，去壁的时候可 ...

请问下，4mg/mL是配制的浓度？还是作用的终浓度？
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6楼2013-06-30 15:56:37
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