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fannyzehong

银虫 (初入文坛)

[求助] 溶菌酶制备及如何破碎细菌细胞壁

老师要我用溶菌酶破碎细胞壁,显微观察无细胞壁的细菌内部结构等等。请教下,这样的溶菌酶怎么配制?浓度?破碎细胞壁的步骤?越详细越好,谢谢了!
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fannyzehong

银虫 (初入文坛)

我从没涉及到这个领域,以前是做组培的。就是想问问溶菌酶是怎么配制的?有人说用水或PBS缓冲液或Tris-HCl。有冰浴也有37°温浴。所以我很糊涂,不知道怎么办。我的目的很简单,就是要把细菌细胞壁破碎了就好。急啊,请大家帮帮我。不甚感激
3楼2012-02-28 14:49:33
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查看全部 6 个回答

j2

木虫 (正式写手)

没做过,不知道跟革兰氏阳性菌提取基因的第一步是不是一样的
修炼ing,当虫仙……
2楼2012-02-28 11:11:04
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j2

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fannyzehong at 2012-02-28 14:49:33:
我从没涉及到这个领域,以前是做组培的。就是想问问溶菌酶是怎么配制的?有人说用水或PBS缓冲液或Tris-HCl。有冰浴也有37°温浴。所以我很糊涂,不知道怎么办。我的目的很简单,就是要把细菌细胞壁破碎了就好。急 ...

溶菌酶用水或PBS缓冲液或Tris-HCl都可以啊,我一般用灭菌水,懒得配制缓冲液
水浴37°C半小时
不知道行不行···还望楼主做出了了分享一下啊
修炼ing,当虫仙……
4楼2012-02-29 09:46:36
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
fannyzehong: 金币+5 2012-03-31 11:02:54
fannyzehong: 金币+5 2012-03-31 11:04:35
我用溶菌酶做过大肠杆菌破壁(用于纯化蛋白)。当时用的浓度是4mg/mL,buffer是50mM Tris-HCl(pH 8.0),50mM Glucose,1mM EDTA,室温放置15分钟。
你想制备原生质体,可能buffer的渗透压要注意点,去壁的时候可以隔一段时间取一点来镜检。
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
5楼2012-02-29 10:29:43
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