应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超声破碎大肠杆菌问题
91/1返回列表
查看: 3315  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎大肠杆菌问题

我做原核表达，收集大肠杆菌中的包涵体。我先用溶菌酶在冰上融了2个小时，工作浓度为1mg/ml，然后超声，300W，超1秒，停3秒，一共超了25分钟，结果在显微镜下观察还是有很多大肠杆菌未破碎。有没有高手告诉我怎么才能将大肠杆菌破碎完全？阿里亚都!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无善无恶心之体
1楼 2012-03-30 11:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-03-30 11:34:08
zhiqiang5070: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:00
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音，要尖锐清脆，╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-30 11:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助~ 2012-04-01 17:52:54
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:15
超声波既不能太低也不能空打，不能起泡，浓度不能太高，有包涵体的话，包涵体也比较大，看上去是菌体，实际是包涵体。
赞一下(1人) 回复此楼
为什么
3楼2012-03-30 15:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Pushing2012

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:30
一是注意你的超声那个探头保证不要碰到容器壁；二是可以工作10s,间歇20s; 超声时冰浴散热
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-30 16:08:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张云云lbl

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么不能起泡啊？我做的时候为什么泡沫很多啊？
探头距离液面一厘米，破壁效是最好的。
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-30 17:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-01 17:54:03
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:43
超声破碎不能起泡沫，另外一定要在冰上进行。我用超5s停5s，工作总时间5~10分钟。探头不能碰到管壁，菌液浓度不宜过大，可以做适量稀释。
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-01 10:45:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司徒雨星

新虫 (初入文坛)
我想问一下 怎么破壁大肠杆菌 我想得到胞内蛋白 有酶活的
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-22 15:12:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by roomofxw at 2012-03-30 11:30:35
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音，要尖锐清脆，╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了

我破碎后，上清活性很低，沉淀活性很高，这是因为破碎不完全还是形成了包涵体，现在破碎功率400w，连着破了90min，还是这样。
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
8楼2013-05-14 23:25:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hraikeyan at 2013-05-14 23:25:52
我破碎后，上清活性很低，沉淀活性很高，这是因为破碎不完全还是形成了包涵体，现在破碎功率400w，连着破了90min，还是这样。...

跑电泳看啊
沉淀中还有很多大肠杆菌蛋白，那就是破碎不完全呗
如果只有诱导蛋白那就是包涵体呗
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-15 08:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhiqiang5070 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 求调剂 +5 yunziaaaaa 2026-03-01 6/300 2026-03-01 23:57 by ccp273206157
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 材料化工调剂 +12 今夏不夏 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:32 by L135790
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 8/400 2026-03-01 22:50 by jian_
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 材料学调剂 +9 提神豆沙包 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:15 by ms629
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭