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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎大肠杆菌问题

我做原核表达,收集大肠杆菌中的包涵体。我先用溶菌酶在冰上融了2个小时,工作浓度为1mg/ml,然后超声,300W,超1秒,停3秒,一共超了25分钟,结果在显微镜下观察还是有很多大肠杆菌未破碎。有没有高手告诉我怎么才能将大肠杆菌破碎完全?阿里亚都!!!
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无善无恶心之体
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roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-03-30 11:34:08
zhiqiang5070: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:00
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音,要尖锐清脆,╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了
2楼2012-03-30 11:30:35
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助~ 2012-04-01 17:52:54
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:15
超声波既不能太低也不能空打,不能起泡,浓度不能太高,有包涵体的话,包涵体也比较大,看上去是菌体,实际是包涵体。
为什么
3楼2012-03-30 15:45:40
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Pushing2012

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:30
一是注意你的超声那个探头保证不要碰到容器壁;二是可以工作10s,间歇20s; 超声时冰浴散热
4楼2012-03-30 16:08:04
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张云云lbl

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么不能起泡啊?我做的时候为什么泡沫很多啊?
探头距离液面一厘米,破壁效是最好的。
5楼2012-03-30 17:59:19
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-01 17:54:03
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:43
超声破碎不能起泡沫,另外一定要在冰上进行。我用超5s停5s,工作总时间5~10分钟。探头不能碰到管壁,菌液浓度不宜过大,可以做适量稀释。
6楼2012-04-01 10:45:22
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司徒雨星

新虫 (初入文坛)

我想问一下 怎么破壁大肠杆菌 我想得到胞内蛋白 有酶活的
7楼2012-06-22 15:12:52
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by roomofxw at 2012-03-30 11:30:35
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音,要尖锐清脆,╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了

我破碎后,上清活性很低,沉淀活性很高,这是因为破碎不完全还是形成了包涵体,现在破碎功率400w,连着破了90min,还是这样。
nothing isimpossible
8楼2013-05-14 23:25:52
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roomofxw

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by hraikeyan at 2013-05-14 23:25:52
我破碎后,上清活性很低,沉淀活性很高,这是因为破碎不完全还是形成了包涵体,现在破碎功率400w,连着破了90min,还是这样。...

跑电泳看啊
沉淀中还有很多大肠杆菌蛋白,那就是破碎不完全呗
如果只有诱导蛋白那就是包涵体呗
9楼2013-05-15 08:48:13
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