应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超声破碎大肠杆菌问题
91/1返回列表
查看: 3338  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎大肠杆菌问题

我做原核表达，收集大肠杆菌中的包涵体。我先用溶菌酶在冰上融了2个小时，工作浓度为1mg/ml，然后超声，300W，超1秒，停3秒，一共超了25分钟，结果在显微镜下观察还是有很多大肠杆菌未破碎。有没有高手告诉我怎么才能将大肠杆菌破碎完全？阿里亚都!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无善无恶心之体
1楼 2012-03-30 11:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-03-30 11:34:08
zhiqiang5070: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:00
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音，要尖锐清脆，╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-30 11:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助~ 2012-04-01 17:52:54
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:15
超声波既不能太低也不能空打，不能起泡，浓度不能太高，有包涵体的话，包涵体也比较大，看上去是菌体，实际是包涵体。
赞一下(1人) 回复此楼
为什么
3楼2012-03-30 15:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Pushing2012

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:30
一是注意你的超声那个探头保证不要碰到容器壁；二是可以工作10s,间歇20s; 超声时冰浴散热
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-30 16:08:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张云云lbl

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么不能起泡啊？我做的时候为什么泡沫很多啊？
探头距离液面一厘米，破壁效是最好的。
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-30 17:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-01 17:54:03
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:43
超声破碎不能起泡沫，另外一定要在冰上进行。我用超5s停5s，工作总时间5~10分钟。探头不能碰到管壁，菌液浓度不宜过大，可以做适量稀释。
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-01 10:45:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司徒雨星

新虫 (初入文坛)
我想问一下 怎么破壁大肠杆菌 我想得到胞内蛋白 有酶活的
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-22 15:12:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by roomofxw at 2012-03-30 11:30:35
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音，要尖锐清脆，╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了

我破碎后，上清活性很低，沉淀活性很高，这是因为破碎不完全还是形成了包涵体，现在破碎功率400w，连着破了90min，还是这样。
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
8楼2013-05-14 23:25:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hraikeyan at 2013-05-14 23:25:52
我破碎后，上清活性很低，沉淀活性很高，这是因为破碎不完全还是形成了包涵体，现在破碎功率400w，连着破了90min，还是这样。...

跑电泳看啊
沉淀中还有很多大肠杆菌蛋白，那就是破碎不完全呗
如果只有诱导蛋白那就是包涵体呗
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-15 08:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhiqiang5070 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 323求调剂 +5 洼小桶 2026-03-18 5/250 2026-03-22 17:38 by luoyongfeng
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:12 by 朱芷琳
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +5 生物工程调剂 2026-03-17 9/450 2026-03-21 23:32 by zhujy1982
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 考研调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 307求调剂 +10 冷笙123 2026-03-17 10/500 2026-03-21 01:54 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 070303 总分349求调剂 +3 LJY9966 2026-03-15 5/250 2026-03-16 14:24 by xwxstudy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭