应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超声破碎大肠杆菌问题
91/1返回列表
查看: 3708  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎大肠杆菌问题

我做原核表达，收集大肠杆菌中的包涵体。我先用溶菌酶在冰上融了2个小时，工作浓度为1mg/ml，然后超声，300W，超1秒，停3秒，一共超了25分钟，结果在显微镜下观察还是有很多大肠杆菌未破碎。有没有高手告诉我怎么才能将大肠杆菌破碎完全？阿里亚都!!!
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
无善无恶心之体
1楼 2012-03-30 11:25:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-03-30 11:34:08
zhiqiang5070: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:00
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音，要尖锐清脆，╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-30 11:30:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助~ 2012-04-01 17:52:54
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:15
超声波既不能太低也不能空打，不能起泡，浓度不能太高，有包涵体的话，包涵体也比较大，看上去是菌体，实际是包涵体。
赞一下(1人) 回复此楼
为什么
3楼2012-03-30 15:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Pushing2012

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:30
一是注意你的超声那个探头保证不要碰到容器壁；二是可以工作10s,间歇20s; 超声时冰浴散热
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-30 16:08:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张云云lbl

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么不能起泡啊？我做的时候为什么泡沫很多啊？
探头距离液面一厘米，破壁效是最好的。
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-30 17:59:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-01 17:54:03
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:43
超声破碎不能起泡沫，另外一定要在冰上进行。我用超5s停5s，工作总时间5~10分钟。探头不能碰到管壁，菌液浓度不宜过大，可以做适量稀释。
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-01 10:45:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

司徒雨星

新虫 (初入文坛)
我想问一下 怎么破壁大肠杆菌 我想得到胞内蛋白 有酶活的
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-22 15:12:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by roomofxw at 2012-03-30 11:30:35
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音，要尖锐清脆，╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了

我破碎后，上清活性很低，沉淀活性很高，这是因为破碎不完全还是形成了包涵体，现在破碎功率400w，连着破了90min，还是这样。
赞一下 回复此楼
nothing isimpossible
8楼2013-05-14 23:25:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hraikeyan at 2013-05-14 23:25:52
我破碎后，上清活性很低，沉淀活性很高，这是因为破碎不完全还是形成了包涵体，现在破碎功率400w，连着破了90min，还是这样。...

跑电泳看啊
沉淀中还有很多大肠杆菌蛋白，那就是破碎不完全呗
如果只有诱导蛋白那就是包涵体呗
赞一下 回复此楼
9楼2013-05-15 08:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhiqiang5070 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:40 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭