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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 超声破碎大肠杆菌问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

[求助] 超声破碎大肠杆菌问题

我做原核表达，收集大肠杆菌中的包涵体。我先用溶菌酶在冰上融了2个小时，工作浓度为1mg/ml，然后超声，300W，超1秒，停3秒，一共超了25分钟，结果在显微镜下观察还是有很多大肠杆菌未破碎。有没有高手告诉我怎么才能将大肠杆菌破碎完全？阿里亚都!!!
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无善无恶心之体
1楼 2012-03-30 11:25:20
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roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-03-30 11:34:08
zhiqiang5070: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:00
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音，要尖锐清脆，╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了
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2楼2012-03-30 11:30:35
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助~ 2012-04-01 17:52:54
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:15
超声波既不能太低也不能空打，不能起泡，浓度不能太高，有包涵体的话，包涵体也比较大，看上去是菌体，实际是包涵体。
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为什么
3楼2012-03-30 15:45:40
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Pushing2012

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:30
一是注意你的超声那个探头保证不要碰到容器壁；二是可以工作10s,间歇20s; 超声时冰浴散热
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4楼2012-03-30 16:08:04
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张云云lbl

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
为什么不能起泡啊？我做的时候为什么泡沫很多啊？
探头距离液面一厘米，破壁效是最好的。
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5楼2012-03-30 17:59:19
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太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-01 17:54:03
zhiqiang5070: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-02 16:24:43
超声破碎不能起泡沫，另外一定要在冰上进行。我用超5s停5s，工作总时间5~10分钟。探头不能碰到管壁，菌液浓度不宜过大，可以做适量稀释。
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6楼2012-04-01 10:45:22
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司徒雨星

新虫 (初入文坛)
我想问一下 怎么破壁大肠杆菌 我想得到胞内蛋白 有酶活的
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7楼2012-06-22 15:12:52
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hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by roomofxw at 2012-03-30 11:30:35
可以超3s 停3s冰浴
菌悬液浓度不要高
耳听超声声音，要尖锐清脆，╮(╯▽╰)╭ 只可意会不可言传了

我破碎后，上清活性很低，沉淀活性很高，这是因为破碎不完全还是形成了包涵体，现在破碎功率400w，连着破了90min，还是这样。
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nothing isimpossible
8楼2013-05-14 23:25:52
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roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by hraikeyan at 2013-05-14 23:25:52
我破碎后，上清活性很低，沉淀活性很高，这是因为破碎不完全还是形成了包涵体，现在破碎功率400w，连着破了90min，还是这样。...

跑电泳看啊
沉淀中还有很多大肠杆菌蛋白，那就是破碎不完全呗
如果只有诱导蛋白那就是包涵体呗
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9楼2013-05-15 08:48:13
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