应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白诱导问题咨询
141/2返回列表12下一页
查看: 1961  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhy19850501

[交流] 【求助/交流】蛋白诱导问题咨询 已有10人参与

大家好，最近做蛋白诱导遇到一些问题，Western blot 检测有目的蛋白表达，但SDS-PAGE检测则看不到明显的目的条带，已经多次优化条件，但没有效果，希望大家多多帮忙，谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-05-05 20:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

todouhy

铜虫 (小有名气)
★
plantaqp(金币+1):谢谢交流 2010-05-06 03:22:18
会不会是形成了包涵体的啊？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-05-05 21:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
plantaqp(金币+1): 2010-05-06 03:22:41
引用回帖:
Originally posted by zhy19850501 at 2010-05-05 20:19:32:
大家好，最近做蛋白诱导遇到一些问题，Western blot 检测有目的蛋白表达，但SDS-PAGE检测则看不到明显的目的条带，已经多次优化条件，但没有效果，希望大家多多帮忙，谢谢！

我也遇到这个问题，换了3种表达载体和2种不同的表达菌株，试过17，25，30，37度条件，加的IPTG终浓度包括有0.1，0.4和1mM。但是都没有很明显的目的条带。只是没有做western来检测。现在也在苦恼怎么在大肠中表达植物基因了。


希望能一起交流！
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-05-05 21:41:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
★
plantaqp(金币+1):谢谢交流 2010-05-06 03:23:04
引用回帖:
Originally posted by todouhy at 2010-05-05 21:32:53:
会不会是形成了包涵体的啊？

和楼主遇到了同样的问题，同时试过了超声波裂解后的上清及沉淀的重悬产物的检测，与对照相比也没有明显差异的蛋白条带。

[ Last edited by dfl204 on 2010-5-5 at 21:44 ]
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-05-05 21:42:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

段家一凡

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
plantaqp(金币+2):谢谢交流 2010-05-06 03:23:24
换表达菌株，真核原核的都试试，还有含稀有密码子的表达菌株也试试。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-05-06 00:00:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
plantaqp(金币+5):谢谢交流 2010-05-06 03:23:36
还应该分析一下你的基因，是不是有穿膜结构，定位在膜上了，如果是这样就麻烦了。我有个蛋白表达也是换了3种菌株，因为一开始以为是稀有密码子含量有6%，以为是这个原因，换了+RIL的也不见好。温度时间IPTG浓度之类的也换个好多条件。用SDSPAGE就是检测不出来
后来分析了序列竟然有7个跨膜区域，觉得有可能在膜上，超声破碎后离心，取沉淀煮煮上样，western blot检测，有非常特异性的带。大小也对，估计就是我要的蛋白了。
现在还不知道后续怎么去纯化好，纯化膜蛋白就我在的实验室平台来说还有些困难，先放着不甩了
赞一下(2人) 回复此楼
终于熬成木虫了……
6楼2010-05-06 01:47:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhy19850501

谢谢大家的帮忙，我诱导的蛋白本身就是膜蛋白，不过在大肠杆菌中诱导时它还会在膜上吗？要正如楼上说的那样，那应该怎么解决这个问题？谢谢！
赞一下 回复此楼
7楼2010-05-06 10:23:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

20091357

无虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
лллл
回复此楼
8楼2010-05-06 10:25:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zjzz at 2010-05-06 01:47:23:
还应该分析一下你的基因，是不是有穿膜结构，定位在膜上了，如果是这样就麻烦了。我有个蛋白表达也是换了3种菌株，因为一开始以为是稀有密码子含量有6%，以为是这个原因，换了+RIL的也不见好。温度时间IPTG浓度之 ...

推荐你读一篇文献：
Effective high throughput overproduction of membrane proteins in E.coli
赞一下(1人) 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
9楼2010-05-06 11:22:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
膜蛋白用一般的诱导条件可能很难诱导出来，你可以读下上面那篇文献和以下文献：
Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures
T7表达系统及自诱导蛋白产出策略

我用该系统做过不少蛋白，不少是IPTG诱导不出来的换这个培养条件可以诱导出来，而且高表达。有问题可以交流。
赞一下(1人) 回复此楼
生物资源交流QQ群：1044518333
10楼2010-05-06 11:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhy19850501 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-15 3/150 2026-03-15 09:12 by JourneyLucky
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 304求调剂 +5 小熊joy 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:07 by peike
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 求调剂（材料与化工327） +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[硕博家园] 深圳大学硕士招生（2026秋，传感器方向，仅录取第一志愿） +4 xujiaoszu 2026-03-11 7/350 2026-03-13 17:28 by xujiaoszu
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 304求调剂（085602一志愿985） +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:56 by houyaoxu
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
[考研] 一志愿山东大学，总分327，英语二79，有论文，有竞赛，已过四六级 +3 木木目目1 2026-03-09 3/150 2026-03-09 19:52 by yuningshan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭