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[交流] 【求助/交流】蛋白诱导问题咨询已有10人参与

大家好，最近做蛋白诱导遇到一些问题，Western blot 检测有目的蛋白表达，但SDS-PAGE检测则看不到明显的目的条带，已经多次优化条件，但没有效果，希望大家多多帮忙，谢谢！

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1楼 2010-05-05 20:19:32

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zjzz

木虫 (正式写手)

在通往变态的坦途上

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 22.2小时
虫号: 326115
注册: 2007-03-17
性别: MM
专业: 微生物/分子生物学

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
plantaqp(金币+5):谢谢交流 2010-05-06 03:23:36

还应该分析一下你的基因，是不是有穿膜结构，定位在膜上了，如果是这样就麻烦了。我有个蛋白表达也是换了3种菌株，因为一开始以为是稀有密码子含量有6%，以为是这个原因，换了+RIL的也不见好。温度时间IPTG浓度之类的也换个好多条件。用SDSPAGE就是检测不出来
后来分析了序列竟然有7个跨膜区域，觉得有可能在膜上，超声破碎后离心，取沉淀煮煮上样，western blot检测，有非常特异性的带。大小也对，估计就是我要的蛋白了。
现在还不知道后续怎么去纯化好，纯化膜蛋白就我在的实验室平台来说还有些困难，先放着不甩了

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终于熬成木虫了……

6楼2010-05-06 01:47:23