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zhy19850501

[交流] 【求助/交流】蛋白诱导问题咨询已有10人参与

大家好,最近做蛋白诱导遇到一些问题,Western blot 检测有目的蛋白表达,但SDS-PAGE检测则看不到明显的目的条带,已经多次优化条件,但没有效果,希望大家多多帮忙,谢谢!
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by zjzz at 2010-05-06 01:47:23:
还应该分析一下你的基因,是不是有穿膜结构,定位在膜上了,如果是这样就麻烦了。我有个蛋白表达也是换了3种菌株,因为一开始以为是稀有密码子含量有6%,以为是这个原因,换了+RIL的也不见好。温度时间IPTG浓度之 ...

推荐你读一篇文献:
Effective high throughput overproduction of membrane proteins in E.coli
生物资源交流QQ群:1044518333
9楼2010-05-06 11:22:22
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
膜蛋白用一般的诱导条件可能很难诱导出来,你可以读下上面那篇文献和以下文献:
Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures
T7表达系统及自诱导蛋白产出策略

我用该系统做过不少蛋白,不少是IPTG诱导不出来的换这个培养条件可以诱导出来,而且高表达。有问题可以交流。
生物资源交流QQ群:1044518333
10楼2010-05-06 11:25:05
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