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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 【求助/交流】IPTG含量
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yangjunzju

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】IPTG含量 已有4人参与

各位虫友：
              请教一个问题，我们做蛋白诱导表达时经常要用到IPTG诱导，但是当加入一定量的IPTG后，经过一段时间后我想知道IPTG是否会被菌体降解。如何确定IPTG在菌液中的含量呢？非常感谢
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1楼 2010-01-28 21:44:58
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
肯定不会被降解。否则就不会选择IPTG作为诱导剂了。

我推荐楼主看下下面这个文献：是关于自诱导培养的。解决了本底表达的问题，表达量可以比IPTG诱导提高好几倍。主要改良的就是培养基，用这个培养基，就不需要在中途测OD，加诱导剂了。整个表达一步完成。好像也可以不加抗生素。作者是pET系统的发明者studier。
我自己做过，效果很好。有问题欢迎交流。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
4楼2010-01-29 09:34:53
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普通回帖

85715623

木虫 (正式写手)
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
yangjunzju(金币+1):一般情况是不降解，但是我们怀疑此菌有降解能力 2010-01-28 23:13
不会被降解，作用就是诱导蛋白表达。
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2楼2010-01-28 22:00:52
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雨中蜗牛

金虫 (正式写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
应该不会吧，目前没有尝试做过此类测试
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■如果如果有一天?k忘記了沵爾一定要記得曾經有一個傻孩子?圻^爾
3楼2010-01-29 09:25:05
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
yangjunzju(金币+2):非常感谢，哈哈，太详细了。。。学习了。。。 2010-01-29 12:44
另附一张我自己做的表达电泳图。
依次为未诱导、BL21 IPTG诱导-1、BL21 IPTG诱导-2、BL21 自诱导培养。
5ml小量诱导，直接取菌液（不离心，不浓缩）加buffer后上样电泳。
可以看出表达量自诱导要高不少。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
5楼2010-01-29 09:38:15
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zier1011

木虫 (著名写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
楼主去百度一下IPTG是什么就知道了，IPTG可用作半乳糖苷酶的诱导物，它是其底物的类似物，却不被微生物代谢利用！
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花还香香的
6楼2010-01-29 09:51:40
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zjwang

木虫 (正式写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2010-01-29 09:38:15:
另附一张我自己做的表达电泳图。
依次为未诱导、BL21 IPTG诱导-1、BL21 IPTG诱导-2、BL21 自诱导培养。
5ml小量诱导，直接取菌液（不离心，不浓缩）加buffer后上样电泳。
可以看出表达量自诱导要高不少。

什么是自诱导？
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7楼2010-01-29 09:51:47
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qdwmq

木虫 (正式写手)
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by zjwang at 2010-01-29 09:51:47:

什么是自诱导？

利用细菌先利用葡萄糖后利用乳糖的特性，使蛋白“自动”表达的方法。
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8楼2010-01-29 10:36:18
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
yangjunzju(金币+1):谢谢参与
发酵的时候，用IPTG诱导太过昂贵，乳糖在一定的程度上降低了成本，但乳糖也比较贵，不知道发酵的过程中，还有没有其他的诱导方法（除了温度）。
赞一下(1人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
9楼2010-01-29 12:48:45
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-01-29 12:48:45:
发酵的时候，用IPTG诱导太过昂贵，乳糖在一定的程度上降低了成本，但乳糖也比较贵，不知道发酵的过程中，还有没有其他的诱导方法（除了温度）。

我也很想知道，欢迎各位指点，交流。。。
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10楼2010-01-29 12:51:41
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