应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提高表达蛋白含量
111/2返回列表12下一页
查看: 2399  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小丁山

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提高表达蛋白含量 已有5人参与

我用转化的大肠杆菌来收集表达的胆盐水解酶，但是每200ml培养液中收集到的却只有几十微克，具体操作是先试管中过夜培养，然后8ml接种至200ml，培养至OD600约0.5-0.6，加IPTG诱导表达4h，然后离心醇沉，上清：甲醇2：1，醇沉1h，离心收集沉淀，但是几乎没有，用考马斯亮兰法测总蛋白含量约为50微克每毫升左右，如何提高这个蛋白产量呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-26 09:32:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rtli1672

金虫 (著名写手)

表达量似乎还可以高点

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看起来你的蛋白是表达后分泌到细胞外的，可以试试不同OD600条件，加长表达时间，另外，不知道IPTG加了多少，有时候IPTG可以多加点才能表达的。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-26 09:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丁山

铜虫 (小有名气)
IPTG 浓度是0.1mM，试图达到2倍IPTG的量，并没有很明显的提高
赞一下 回复此楼
3楼2010-09-26 09:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan66007

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做优化，优化诱导时机、培养基、IPTG的浓度、诱导时间，每种都可以做上百个样；或者换个载体试试
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-26 12:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan66007

木虫 (正式写手)
做生物急不得的，要有耐心
赞一下 回复此楼
5楼2010-09-26 12:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

粉靛蓝

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先你要把这个菌的生长曲线测出来，确定对数生长期，这样才能选择最佳的诱导时间，像你这种需要提高表达量的，是一个十分庞大的工程，并不是简单搞搞就能搞定的，还有你要确定下你这个是胞外酶吗？多数工程菌都产生胞内酶。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-09-26 13:03:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

粉靛蓝

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by rtli1672 at 2010-09-26 09:45:48:
看起来你的蛋白是表达后分泌到细胞外的，可以试试不同OD600条件，加长表达时间，另外，不知道IPTG加了多少，有时候IPTG可以多加点才能表达的。

并不是IPTG越高越好，有的菌需要低浓度的IPTG诱导，你需要考察。
赞一下 回复此楼
7楼2010-09-26 13:04:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丁山

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 粉靛蓝 at 2010-09-26 13:04:35:

并不是IPTG越高越好，有的菌需要低浓度的IPTG诱导，你需要考察。

这项已经考察过了，一半含量和2倍量的IPTG没有明显的效果
赞一下 回复此楼
8楼2010-09-26 13:31:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丁山

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 粉靛蓝 at 2010-09-26 13:03:04:
首先你要把这个菌的生长曲线测出来，确定对数生长期，这样才能选择最佳的诱导时间，像你这种需要提高表达量的，是一个十分庞大的工程，并不是简单搞搞就能搞定的，还有你要确定下你这个是胞外酶吗？多数工程菌都产 ...

这个工作在之前已经完成，生长至0.5-0.6就达到了对数期，这个课题已经进行了大半年了，这边表达提取顺利就可以结题了
赞一下 回复此楼
9楼2010-09-26 13:34:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丁山

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liyan66007 at 2010-09-26 12:43:40:
做优化，优化诱导时机、培养基、IPTG的浓度、诱导时间，每种都可以做上百个样；或者换个载体试试

这些都已经考察过了，我还加入底物，给菌体一定选择压力，有一些效果
赞一下 回复此楼
10楼2010-09-26 13:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小丁山 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[硕博家园] 上海工程技术大学 激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生 +5 oxidpl 2026-09-20 7/350 2026-09-27 10:43 by Equinoxhua
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:15 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:03 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:39 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[教师之家] 课题组招2027级博士 上海工程技术大学 激光智能制造方向 +4 oxidpl 2026-09-20 6/300 2026-09-24 20:37 by oxidpl
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭