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小丁山

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提高表达蛋白含量 已有5人参与

我用转化的大肠杆菌来收集表达的胆盐水解酶,但是每200ml培养液中收集到的却只有几十微克,具体操作是先试管中过夜培养,然后8ml接种至200ml,培养至OD600约0.5-0.6,加IPTG诱导表达4h,然后离心醇沉,上清:甲醇2:1,醇沉1h,离心收集沉淀,但是几乎没有,用考马斯亮兰法测总蛋白含量约为50微克每毫升左右,如何提高这个蛋白产量呢
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粉靛蓝

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
首先你要把这个菌的生长曲线测出来,确定对数生长期,这样才能选择最佳的诱导时间,像你这种需要提高表达量的,是一个十分庞大的工程,并不是简单搞搞就能搞定的,还有你要确定下你这个是胞外酶吗?多数工程菌都产生胞内酶。
6楼2010-09-26 13:03:04
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粉靛蓝

木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by rtli1672 at 2010-09-26 09:45:48:
看起来你的蛋白是表达后分泌到细胞外的,可以试试不同OD600条件,加长表达时间,另外,不知道IPTG加了多少,有时候IPTG可以多加点才能表达的。

并不是IPTG越高越好,有的菌需要低浓度的IPTG诱导,你需要考察。
7楼2010-09-26 13:04:35
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