24小时热门版块排行榜    

查看: 1723  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小丁山

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】提高表达蛋白含量 已有5人参与

我用转化的大肠杆菌来收集表达的胆盐水解酶,但是每200ml培养液中收集到的却只有几十微克,具体操作是先试管中过夜培养,然后8ml接种至200ml,培养至OD600约0.5-0.6,加IPTG诱导表达4h,然后离心醇沉,上清:甲醇2:1,醇沉1h,离心收集沉淀,但是几乎没有,用考马斯亮兰法测总蛋白含量约为50微克每毫升左右,如何提高这个蛋白产量呢
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan66007

木虫 (正式写手)

做生物急不得的,要有耐心
5楼2010-09-26 12:44:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

rtli1672

金虫 (著名写手)

表达量似乎还可以高点


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看起来你的蛋白是表达后分泌到细胞外的,可以试试不同OD600条件,加长表达时间,另外,不知道IPTG加了多少,有时候IPTG可以多加点才能表达的。
2楼2010-09-26 09:45:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丁山

铜虫 (小有名气)

IPTG 浓度是0.1mM,试图达到2倍IPTG的量,并没有很明显的提高
3楼2010-09-26 09:53:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyan66007

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做优化,优化诱导时机、培养基、IPTG的浓度、诱导时间,每种都可以做上百个样;或者换个载体试试
4楼2010-09-26 12:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 材料复试调剂 +3 学材料的点 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:07 by ccp273206157
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分,求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[考研] 272求调剂 +6 田智友 2026-02-28 6/300 2026-03-01 21:40 by 公瑾逍遥
[考研] 274求调剂 +3 cgyzqwn 2026-03-01 6/300 2026-03-01 21:24 by cgyzqwn
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 303求调剂 +4 今夏不夏 2026-03-01 4/200 2026-03-01 14:46 by 嘟嘟小浣熊
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 298求调剂 +9 人间唯你是清欢 2026-02-28 12/600 2026-03-01 14:23 by Ducount.Y
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见