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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选时IPTG，Xgal，Amp的用量
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 蓝白斑筛选时IPTG，Xgal，Amp的用量

蓝白斑筛选时IPTG，Xgal，Amp的用量具体是多少啊？
来个权威的！！！看了网上好多说法，都不大相同。。。。。纠结的我啊！
要权威的啊！！！咱不差钱。还有母液浓度，工作浓度等等
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好孩子！
1楼 2012-01-09 15:26:57
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回帖置顶 ( 共有1个 )

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木(金币+1, MolEPI+1): GOOD! 2012-01-10 09:45:41
西瓜(金币+3): Good!追加奖励~ 2012-01-10 15:51:06
zhang8826857(金币+10): ★★★很有帮助 2012-01-10 20:44:38
zhang8826857(金币+5): ★有帮助 2012-01-10 20:45:09
zhang8826857(金币+4): ★★★很有帮助 2012-01-10 20:46:19
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-01-09 22:18:44:
我找了找没找到啊，你帮我找下吧，50金币都给你

首先把IPTG配制成24 mg/ml（100 mM）的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然
   后在100 ml的琼脂培养基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml
    的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（100 mg/ml），制作成IPTG、
    X-Gal、Amp平板培养基。
  当DNA片段插入至pUC系列载体（或其他带有lacZ、Amp基因载体），然后转化
至lacZ缺失细胞中后，涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基，可根据长出
  菌体的蓝白色，而方便地挑选出基因重组体（白色为具有DNA插入片段的基因重组
体）.
这是它们的原文，http://www.takara.com.cn/?action ... =445&subclass=1，这是链接，点击一下说明书，下载就可以了。金币就免了，哈哈。
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5楼2012-01-10 08:51:11
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普通回帖

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+4): Good！ 2012-01-09 17:39:10
zhang8826857(金币+5): ★★★很有帮助 2012-01-10 20:44:51
Amp肯定是100ug/mg,x-gal是2%,每个平板取40uL涂布，IPTG是20%，每个平板取7uL涂布~~~以上是分子克隆里面的说法，其实只要能显色就行，可以自己调整的。我刚做了一次发现显色较浅，可能是显色剂x-gal有问题，多多交流吧~~~
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2楼2012-01-09 16:13:00
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豆豆鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+3): ★有帮助 2012-01-10 20:44:58
我们参照宝生物公司的商品目录上的浓度操作，具体的你可以到宝生物官网上查询到的。
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3楼2012-01-09 22:05:05
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 豆豆鱼 at 2012-01-09 22:05:05:
我们参照宝生物公司的商品目录上的浓度操作，具体的你可以到宝生物官网上查询到的。

我找了找没找到啊，你帮我找下吧，50金币都给你
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好孩子！
4楼2012-01-09 22:18:44
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豆豆鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zhang8826857(金币+5): ★有帮助 2012-01-10 20:45:22
楼上的已经帮你找到了，你自己看看会有帮助的，另外如果有其他实验试剂方面的问题，你也可以到一些有名的生物公司网站上查找使用说明，会对你有帮助的，祝实验顺利！
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6楼2012-01-10 09:55:53
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豆豆鱼

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by joan198108 at 2012-01-10 08:51:11:
首先把IPTG配制成24 mg/ml（100 mM）的水溶液，并进行过滤除菌后保存。然
   后在100 ml的琼脂培养基中，加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal（20 mg/ml
    的二甲基甲酰胺（DMF）溶液）和100 μl的Amp（ ...

呵呵，楼上的真是热心，具体位置都给找全了，
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7楼2012-01-10 09:58:39
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AnaSequence

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): 鼓励应助！经验哦！ 2012-01-10 15:52:35
zhang8826857(金币+5): ★有帮助 2012-01-10 20:45:28
Amp少一点也是可以的，只要不养过头出来太多卫星菌落就可以了。IPTG多加一点也是可以的，加多的话，直接跟Amp一起加到培养基，混合再倒板都可以，就是起诱导作用而已。底物X-gal不能少，一般最后加，加了就要赶紧涂布，特别是平板吹得比较干的情况下，不然涂不均匀，影响显色。显色不好的话，放4°C冰箱，有帮助。
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8楼2012-01-10 11:34:41
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longrna

新虫 (正式写手)
★ ★
西瓜(金币+2): 也是可以的 2012-01-10 15:52:49
我们是制作Amp培养基。
然后在涂板前加入IPTG、X-Gal及菌液一起涂于平板上。
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伟大航线....
9楼2012-01-10 15:49:36
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痴客

木虫 (正式写手)

吃货250

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-01-10 20:12:16
zhang8826857(金币+5): ★有帮助 2012-01-10 20:45:40
2%的x-gal,每个平板取40uL涂布，20%的IPTG每个平板取7uL涂布，amp 3uL，一共是50μL；可以根据平板数量配混合液，注意x-gal要避光，涂完的平板也要避光
赞一下(1人) 回复此楼
因为这个世界上这么多的狼，我这只牧羊犬只好放弃我的温顺，向着这个世界放出最耀眼的光。
10楼2012-01-10 17:14:05
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