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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 蓝白斑筛选时IPTG,Xgal,Amp的用量

蓝白斑筛选时IPTG,Xgal,Amp的用量具体是多少啊?
来个权威的!!!看了网上好多说法,都不大相同。。。。。纠结的我啊!
要权威的啊!!!咱不差钱。还有母液浓度,工作浓度等等
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好孩子!
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木(金币+1, MolEPI+1): GOOD! 2012-01-10 09:45:41
西瓜(金币+3): Good!追加奖励~ 2012-01-10 15:51:06
zhang8826857(金币+10): ★★★很有帮助 2012-01-10 20:44:38
zhang8826857(金币+5): 有帮助 2012-01-10 20:45:09
zhang8826857(金币+4): ★★★很有帮助 2012-01-10 20:46:19
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-01-09 22:18:44:
我找了找没找到啊,你帮我找下吧,50金币都给你

首先把IPTG配制成24 mg/ml(100 mM)的水溶液,并进行过滤除菌后保存。然
   后在100 ml的琼脂培养基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml
    的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、
    X-Gal、Amp平板培养基。
  当DNA片段插入至pUC系列载体(或其他带有lacZ、Amp基因载体),然后转化
至lacZ缺失细胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培养基,可根据长出
  菌体的蓝白色,而方便地挑选出基因重组体(白色为具有DNA插入片段的基因重组
体).
这是它们的原文,http://www.takara.com.cn/?action ... =445&subclass=1,这是链接,点击一下说明书,下载就可以了。金币就免了,哈哈。
5楼2012-01-10 08:51:11
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liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+4): Good! 2012-01-09 17:39:10
zhang8826857(金币+5): ★★★很有帮助 2012-01-10 20:44:51
Amp肯定是100ug/mg,x-gal是2%,每个平板取40uL涂布,IPTG是20%,每个平板取7uL涂布~~~以上是分子克隆里面的说法,其实只要能显色就行,可以自己调整的。我刚做了一次发现显色较浅,可能是显色剂x-gal有问题,多多交流吧~~~
2楼2012-01-09 16:13:00
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豆豆鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
zhang8826857(金币+3): 有帮助 2012-01-10 20:44:58
我们参照宝生物公司的商品目录上的浓度操作,具体的你可以到宝生物官网上查询到的。
3楼2012-01-09 22:05:05
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 豆豆鱼 at 2012-01-09 22:05:05:
我们参照宝生物公司的商品目录上的浓度操作,具体的你可以到宝生物官网上查询到的。

我找了找没找到啊,你帮我找下吧,50金币都给你
好孩子!
4楼2012-01-09 22:18:44
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