应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蓝白斑筛选
91/1返回列表
查看: 1673  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选 已有5人参与

做TA克隆，Amp/IPTG/X-gal的LB板子上没有长蓝斑，长了10个左右白斑，挑了一下，摇瓶过夜（加入氨苄），次日有6瓶长菌了，提质粒，琼脂糖电泳检测，却没有条带，这是为什么呢？请大家给点意见，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
尔非我焉知我悲喜
1楼 2010-06-04 15:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
sdluqun(金币+1):质粒提取还是用之前的试剂盒，抗生素用于筛选的时候还可行...谢谢您的意见 2010-06-04 15:16:15
sdluqun(金币+1): 2010-06-04 15:26:09
抗生素失效
或者
质粒提取过程有问题
赞一下 回复此楼
2楼2010-06-04 15:13:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
sdluqun(金币+1):我这次全部涂了，请问你一般自己做感受态还是买的商业化的？我用的是自己做的 2010-06-04 15:30:40
蓝白斑筛选，长的够少的，你是涂了多少还是全涂了。奇怪你怎么才长10个呢
我一般要是涂100ul的话就能长的满板子，一般都会有几个篮板。如果提不出质粒来，很可能长的是杂菌。。。
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-06-04 15:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
sdluqun(金币+1):恩 我也是按这个自己做的 转的一个环形质粒 长得很满 所以觉得也不是感受态的问题 这个实验都把我困了一个多月了 郁闷啊 2010-06-04 18:12:04
就是用改良氯化钙法自己做的。。效率可以。。。
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-06-04 15:33:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
sdluqun(金币+1):好的 谢谢交流 2010-06-04 18:12:37
感受态是做好之后第一次用么？

感受态不转东西直接涂个氨苄板，看看是不是污染了
赞一下 回复此楼
5楼2010-06-04 15:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):感谢分享经验~~ 2010-06-04 18:48:22
sdluqun(金币+5):之前用Takara的做了好几次，什么也没找，我就买了promega的，体系用的就是您说的这个，也是4度冰箱过夜，这次出现了这种情况，哎，我都郁闷的不行了 2010-06-04 22:28:52
引用回帖:
Originally posted by sdluqun at 2010-06-04 15:10:51:
做TA克隆，Amp/IPTG/X-gal的LB板子上没有长蓝斑，长了10个左右白斑，挑了一下，摇瓶过夜（加入氨苄），次日有6瓶长菌了，提质粒，琼脂糖电泳检测，却没有条带，这是为什么呢？请大家给点意见，谢谢

你用的Taq酶应该能在末尾加A吧，不知道你是用的什么T载体，我们用的是promego的pGEM-T easy ，链接体系一般：
pGEM-T easy  1 ul
连接酶           1ul
2*buffer        5ul
连接片段        3ul

4℃连接过夜，效率挺高的啊。

[ Last edited by fungixx on 2010-6-4 at 18:22 ]
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-06-04 18:19:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

85715623

木虫 (正式写手)
sdluqun(金币+1): 2010-06-04 22:30:05
估计是感受态细胞出了问题。
赞一下 回复此楼
7楼2010-06-04 18:22:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王碧寒

金虫 (小有名气)
sdluqun(金币+1):谢谢您的意见，插入片段不对是什么意思呢？ 2010-06-05 22:53:01
我遇到过这种情况，有可能插入的片段不对，amp板容易长杂菌
赞一下 回复此楼
8楼2010-06-05 11:32:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奋斗的猪猪

银虫 (初入文坛)
sdluqun(金币+2):谢谢 这个还真没系统做过 我再试试 2010-06-05 22:53:36
现在看来药品都没有问题，是不是考虑一下的你的连接体系呢，DNA的量可以调整一下试试吧。而且，蓝白斑筛选的假阳性也是有的。多试几次就好了，有些东西不是我们想像的那么好用。不然好多研究早就做出来了。
赞一下 回复此楼
9楼2010-06-05 15:35:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sdluqun 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +7 YXCT 2026-03-01 8/400 2026-03-02 10:37 by YXCT
[考研] 材料学硕318求调剂 +12 February_Feb 2026-03-01 14/700 2026-03-02 10:32 by 冠c哥
[基金申请] 成果系统访问量大，请15分钟后再尝试。由此给您造成的不便，敬请谅解。 +4 xhuama 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:28 by 19850826zhao
[考研] 0854复试调剂 276 +4 wmm9 2026-03-01 6/300 2026-03-02 09:28 by 热情沙漠
[考研] 材料类求调剂 +11 wana_kiko 2026-02-28 14/700 2026-03-02 08:46 by 聪明的大松鼠
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[考研] 哈工大计算机刘劼团队招生 +3 hit_aiot 2026-03-01 5/250 2026-03-02 07:48 by 得鹿梦鱼111
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 0856调剂 +5 刘梦微 2026-02-28 5/250 2026-03-01 22:30 by wang_dand
[考研] 299求调剂 +3 Y墨明棋妙Y 2026-02-28 5/250 2026-03-01 21:01 by tangxiaotian
[考研] 0856化工专硕求调剂 +12 董boxing 2026-03-01 12/600 2026-03-01 19:45 by 材子momo
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 290求调剂 +9 材料专硕调剂； 2026-02-28 11/550 2026-03-01 17:21 by sunny81
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭