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sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选 已有5人参与

做TA克隆,Amp/IPTG/X-gal的LB板子上没有长蓝斑,长了10个左右白斑,挑了一下,摇瓶过夜(加入氨苄),次日有6瓶长菌了,提质粒,琼脂糖电泳检测,却没有条带,这是为什么呢?请大家给点意见,谢谢
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尔非我焉知我悲喜
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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sdluqun(金币+1):我这次全部涂了,请问你一般自己做感受态还是买的商业化的?我用的是自己做的 2010-06-04 15:30:40
蓝白斑筛选,长的够少的,你是涂了多少还是全涂了。奇怪你怎么才长10个呢
我一般要是涂100ul的话就能长的满板子,一般都会有几个篮板。如果提不出质粒来,很可能长的是杂菌。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-06-04 15:26:49
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ben1147

木虫 (正式写手)

sdluqun(金币+1):质粒提取还是用之前的试剂盒,抗生素用于筛选的时候还可行...谢谢您的意见 2010-06-04 15:16:15
sdluqun(金币+1): 2010-06-04 15:26:09
抗生素失效
或者
质粒提取过程有问题
2楼2010-06-04 15:13:43
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

sdluqun(金币+1):恩 我也是按这个自己做的 转的一个环形质粒 长得很满 所以觉得也不是感受态的问题 这个实验都把我困了一个多月了 郁闷啊 2010-06-04 18:12:04
就是用改良氯化钙法自己做的。。效率可以。。。
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-06-04 15:33:27
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ben1147

木虫 (正式写手)

sdluqun(金币+1):好的 谢谢交流 2010-06-04 18:12:37
感受态是做好之后第一次用么?

感受态不转东西直接涂个氨苄板,看看是不是污染了
5楼2010-06-04 15:52:43
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