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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hong303030

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】请教:蓝白斑筛选,菌检杂带现象

最近做转化蓝白斑筛选,挑取白斑菌检,发现出现杂带现象,如图所示:测序出现双峰,测不通,请教各位大牛指点原因,多谢!

说明一下,转化用的是公司的载体,感受态是与载体一块的,不存在污染现象,同时用的是LB的培养基,kan抗性,LB没有被污染
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)



hong303030(金币+1):谢谢参与
hong303030(金币+2): 2010-11-12 21:21:15
我做菌落PCR也经常出现这种情况,是PCR产物直接i连T载体吗?一般情况可能是PCR产物不纯,建议把PCR产物跑个胶回收需要大小的片断再做连接。
2楼2010-11-12 17:04:07
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heyang835

禁虫 (正式写手)


hong303030(金币+1):谢谢参与
hong303030(金币+2): 2010-11-12 21:21:29
本帖内容被屏蔽

3楼2010-11-12 17:16:32
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hong303030

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by lvbobo823 at 2010-11-12 17:04:07:
我做菌落PCR也经常出现这种情况,是PCR产物直接i连T载体吗?一般情况可能是PCR产物不纯,建议把PCR产物跑个胶回收需要大小的片断再做连接。

本来我也是以为PCR的问题,所以我重新P了一遍,而且我跑电泳的时间特意延长了,但是没有发现杂带,而且我的连接产物都是胶回收之后的,我认为应该不是PCR产物的问题
5楼2010-11-12 21:20:53
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hong303030

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by heyang835 at 2010-11-12 17:16:32:
PRC纯化

我的连接产物都是PCR胶回收的产物,P的过程中没有杂带出现,呵呵
6楼2010-11-12 21:22:30
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简单回复
eudemoncm4楼
2010-11-12 18:01   回复  
hong303030(金币+1):谢谢参与
amisking:不要纯表。 2010-11-12 21:26:37
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