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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教：蓝白斑筛选，菌检杂带现象
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hong303030

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教：蓝白斑筛选，菌检杂带现象

最近做转化蓝白斑筛选，挑取白斑菌检，发现出现杂带现象，如图所示：测序出现双峰，测不通，请教各位大牛指点原因，多谢！

说明一下，转化用的是公司的载体，感受态是与载体一块的，不存在污染现象，同时用的是LB的培养基，kan抗性，LB没有被污染
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1楼 2010-11-12 16:56:23
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★
hong303030(金币+1):谢谢参与
hong303030(金币+2): 2010-11-12 21:21:15
我做菌落PCR也经常出现这种情况，是PCR产物直接i连T载体吗？一般情况可能是PCR产物不纯，建议把PCR产物跑个胶回收需要大小的片断再做连接。
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2楼2010-11-12 17:04:07
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heyang835

禁虫 (正式写手)
★
hong303030(金币+1):谢谢参与
hong303030(金币+2): 2010-11-12 21:21:29
本帖内容被屏蔽
3楼2010-11-12 17:16:32
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hong303030

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lvbobo823 at 2010-11-12 17:04:07:
我做菌落PCR也经常出现这种情况，是PCR产物直接i连T载体吗？一般情况可能是PCR产物不纯，建议把PCR产物跑个胶回收需要大小的片断再做连接。

本来我也是以为PCR的问题，所以我重新P了一遍，而且我跑电泳的时间特意延长了，但是没有发现杂带，而且我的连接产物都是胶回收之后的，我认为应该不是PCR产物的问题
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5楼2010-11-12 21:20:53
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hong303030

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by heyang835 at 2010-11-12 17:16:32:
PRC纯化

我的连接产物都是PCR胶回收的产物，P的过程中没有杂带出现，呵呵
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6楼2010-11-12 21:22:30
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eudemoncm4楼
2010-11-12 18:01   回复  
hong303030(金币+1):谢谢参与
amisking:不要纯表。 2010-11-12 21:26:37
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