应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蓝白斑筛选
91/1返回列表
查看: 1704  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选 已有5人参与

做TA克隆，Amp/IPTG/X-gal的LB板子上没有长蓝斑，长了10个左右白斑，挑了一下，摇瓶过夜（加入氨苄），次日有6瓶长菌了，提质粒，琼脂糖电泳检测，却没有条带，这是为什么呢？请大家给点意见，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
尔非我焉知我悲喜
1楼 2010-06-04 15:10:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
sdluqun(金币+1):质粒提取还是用之前的试剂盒，抗生素用于筛选的时候还可行...谢谢您的意见 2010-06-04 15:16:15
sdluqun(金币+1): 2010-06-04 15:26:09
抗生素失效
或者
质粒提取过程有问题
赞一下 回复此楼
2楼2010-06-04 15:13:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
sdluqun(金币+1):我这次全部涂了，请问你一般自己做感受态还是买的商业化的？我用的是自己做的 2010-06-04 15:30:40
蓝白斑筛选，长的够少的，你是涂了多少还是全涂了。奇怪你怎么才长10个呢
我一般要是涂100ul的话就能长的满板子，一般都会有几个篮板。如果提不出质粒来，很可能长的是杂菌。。。
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-06-04 15:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
sdluqun(金币+1):恩 我也是按这个自己做的 转的一个环形质粒 长得很满 所以觉得也不是感受态的问题 这个实验都把我困了一个多月了 郁闷啊 2010-06-04 18:12:04
就是用改良氯化钙法自己做的。。效率可以。。。
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-06-04 15:33:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ben1147

木虫 (正式写手)
sdluqun(金币+1):好的 谢谢交流 2010-06-04 18:12:37
感受态是做好之后第一次用么？

感受态不转东西直接涂个氨苄板，看看是不是污染了
赞一下 回复此楼
5楼2010-06-04 15:52:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3):感谢分享经验~~ 2010-06-04 18:48:22
sdluqun(金币+5):之前用Takara的做了好几次，什么也没找，我就买了promega的，体系用的就是您说的这个，也是4度冰箱过夜，这次出现了这种情况，哎，我都郁闷的不行了 2010-06-04 22:28:52
引用回帖:
Originally posted by sdluqun at 2010-06-04 15:10:51:
做TA克隆，Amp/IPTG/X-gal的LB板子上没有长蓝斑，长了10个左右白斑，挑了一下，摇瓶过夜（加入氨苄），次日有6瓶长菌了，提质粒，琼脂糖电泳检测，却没有条带，这是为什么呢？请大家给点意见，谢谢

你用的Taq酶应该能在末尾加A吧，不知道你是用的什么T载体，我们用的是promego的pGEM-T easy ，链接体系一般：
pGEM-T easy  1 ul
连接酶           1ul
2*buffer        5ul
连接片段        3ul

4℃连接过夜，效率挺高的啊。

[ Last edited by fungixx on 2010-6-4 at 18:22 ]
赞一下(1人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
6楼2010-06-04 18:19:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

85715623

木虫 (正式写手)
sdluqun(金币+1): 2010-06-04 22:30:05
估计是感受态细胞出了问题。
赞一下 回复此楼
7楼2010-06-04 18:22:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王碧寒

金虫 (小有名气)
sdluqun(金币+1):谢谢您的意见，插入片段不对是什么意思呢？ 2010-06-05 22:53:01
我遇到过这种情况，有可能插入的片段不对，amp板容易长杂菌
赞一下 回复此楼
8楼2010-06-05 11:32:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

奋斗的猪猪

银虫 (初入文坛)
sdluqun(金币+2):谢谢 这个还真没系统做过 我再试试 2010-06-05 22:53:36
现在看来药品都没有问题，是不是考虑一下的你的连接体系呢，DNA的量可以调整一下试试吧。而且，蓝白斑筛选的假阳性也是有的。多试几次就好了，有些东西不是我们想像的那么好用。不然好多研究早就做出来了。
赞一下 回复此楼
9楼2010-06-05 15:35:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sdluqun 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +4 某某某某位 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:30 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 材料工程（专）一志愿985 初试335求调剂 +3 hiloiy 2026-03-17 4/200 2026-03-21 03:04 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 288求调剂 +16 于海海海海 2026-03-19 16/800 2026-03-20 22:28 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭