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sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

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[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选已有5人参与

做TA克隆，Amp/IPTG/X-gal的LB板子上没有长蓝斑，长了10个左右白斑，挑了一下，摇瓶过夜（加入氨苄），次日有6瓶长菌了，提质粒，琼脂糖电泳检测，却没有条带，这是为什么呢？请大家给点意见，谢谢

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尔非我焉知我悲喜

1楼 2010-06-04 15:10:51

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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lstt09nk(金币+3):感谢分享经验~~ 2010-06-04 18:48:22
sdluqun(金币+5):之前用Takara的做了好几次，什么也没找，我就买了promega的，体系用的就是您说的这个，也是4度冰箱过夜，这次出现了这种情况，哎，我都郁闷的不行了 2010-06-04 22:28:52

引用回帖:

Originally posted by sdluqun at 2010-06-04 15:10:51:
做TA克隆，Amp/IPTG/X-gal的LB板子上没有长蓝斑，长了10个左右白斑，挑了一下，摇瓶过夜（加入氨苄），次日有6瓶长菌了，提质粒，琼脂糖电泳检测，却没有条带，这是为什么呢？请大家给点意见，谢谢

你用的Taq酶应该能在末尾加A吧，不知道你是用的什么T载体，我们用的是promego的pGEM-T easy ，链接体系一般：
pGEM-T easy  1 ul
连接酶          1ul
2*buffer       5ul
连接片段       3ul

4℃连接过夜，效率挺高的啊。

[ Last edited by fungixx on 2010-6-4 at 18:22 ]