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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蓝白斑筛选
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sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

[交流] 【求助/交流】蓝白斑筛选 已有5人参与

做TA克隆，Amp/IPTG/X-gal的LB板子上没有长蓝斑，长了10个左右白斑，挑了一下，摇瓶过夜（加入氨苄），次日有6瓶长菌了，提质粒，琼脂糖电泳检测，却没有条带，这是为什么呢？请大家给点意见，谢谢
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尔非我焉知我悲喜
1楼 2010-06-04 15:10:51
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奋斗的猪猪

银虫 (初入文坛)
sdluqun(金币+2):谢谢 这个还真没系统做过 我再试试 2010-06-05 22:53:36
现在看来药品都没有问题，是不是考虑一下的你的连接体系呢，DNA的量可以调整一下试试吧。而且，蓝白斑筛选的假阳性也是有的。多试几次就好了，有些东西不是我们想像的那么好用。不然好多研究早就做出来了。
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9楼2010-06-05 15:35:19
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ben1147

木虫 (正式写手)
sdluqun(金币+1):质粒提取还是用之前的试剂盒，抗生素用于筛选的时候还可行...谢谢您的意见 2010-06-04 15:16:15
sdluqun(金币+1): 2010-06-04 15:26:09
抗生素失效
或者
质粒提取过程有问题
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2楼2010-06-04 15:13:43
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

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sdluqun(金币+1):我这次全部涂了，请问你一般自己做感受态还是买的商业化的？我用的是自己做的 2010-06-04 15:30:40
蓝白斑筛选，长的够少的，你是涂了多少还是全涂了。奇怪你怎么才长10个呢
我一般要是涂100ul的话就能长的满板子，一般都会有几个篮板。如果提不出质粒来，很可能长的是杂菌。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
3楼2010-06-04 15:26:49
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
sdluqun(金币+1):恩 我也是按这个自己做的 转的一个环形质粒 长得很满 所以觉得也不是感受态的问题 这个实验都把我困了一个多月了 郁闷啊 2010-06-04 18:12:04
就是用改良氯化钙法自己做的。。效率可以。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-06-04 15:33:27
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