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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝斑和白斑都有带，为什么呢 急。
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索索00

铁虫 (小有名气)

[求助] 蓝斑和白斑都有带，为什么呢 急。

我现在的疑问是：我对我的对照组进行了质粒提取检测，发现篮板和白色菌落都有带还很亮，有图片，第一个是原来的质粒，后面四个是长得菌落，前面两个是蓝斑，后面是百菌落，按理说，用一个环状的质粒做转化的话，他不应该有带的，可是现在，，，，，什么原因，还请各位帮忙分析下，谢谢啦！
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1楼 2011-12-19 07:46:48
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longrna

新虫 (正式写手)
用环状的质粒做转化不应该有带？ 不是很明白什么意思。
楼主可以把整个实验说清楚一些，还有质粒是什么质粒，菌落PCR是怎么P的之类...
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伟大航线....
2楼2011-12-19 09:20:35
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-22 18:27:18
PCR假阳性，所以单做PCR是不行的，还要酶切验证！
原因：1 可能是质粒并没有完全转化到细菌中去，而是吸附在表面。2 可能是细菌基因组内有引物结合位点
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真相是最大的奢侈品
3楼2011-12-19 09:35:38
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gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-22 18:27:38
这是质粒图还是PCR结果？要是质粒图，你的蓝白斑都阴性，要是PCR鉴定的结果，还是对质粒双酶切看看吧，PCR鉴定的假阳性都很多，PCR结果不可信，可能是PCR污染导致的！
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大家共同交流、共同提高！！！
4楼2011-12-19 18:35:02
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good！ 2011-12-22 18:28:03
你用的是特异引物吧，转化时质粒用量较高，质粒涂在平板上，PCR可以扩增30亿倍，也就是说你挑点培养基也可以P出带来。有两种办法：1，用载体通用引物P；2，用2ml管摇菌后再PCR。
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生命不息，探索不止。
5楼2011-12-19 20:03:36
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我很奇怪为什么环状的质粒转化不应该有结果？而且是说提质粒没结果还是PCR没结果？
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6楼2011-12-19 23:40:41
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索索00

铁虫 (小有名气)
索索00: 回帖置顶 2011-12-21 14:32:52
引用回帖:
2楼: Originally posted by longrna at 2011-12-19 09:20:35:
用环状的质粒做转化不应该有带？ 不是很明白什么意思。
楼主可以把整个实验说清楚一些，还有质粒是什么质粒，菌落PCR是怎么P的之类...

恩 好的：      我现在又重新做了，用为我的连接产物提了质粒，条带是有的，说明我的外源DNA转进去了，可是，为什么就是只长几个呢？这一次的从头到尾都是师兄一个人操作，他的长了有100百多，我的就只有几个，要疯掉了。不知道是哪出错了，步骤方法是没有问题的，别人都做出来了，我就不行。。。。哎。
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7楼2011-12-21 14:32:42
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索索00

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by piaoyunokok at 2011-12-19 23:40:41:
我很奇怪为什么环状的质粒转化不应该有结果？而且是说提质粒没结果还是PCR没结果？

PCR是有的，质粒也有呢。都有带，给你看下图片
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8楼2011-12-21 14:33:48
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是在做克隆吗？如果是克隆的话就不要纠结别人长得多你的长得少，只要有一个对了就好，连接鉴定的话建议不要用PCR，一个快检，一个酶切鉴定就足够了
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在等待中涅槃重生
9楼2011-12-21 15:25:18
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索索00

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by yuxia82012 at 2011-12-21 15:25:18:
你是在做克隆吗？如果是克隆的话就不要纠结别人长得多你的长得少，只要有一个对了就好，连接鉴定的话建议不要用PCR，一个快检，一个酶切鉴定就足够了

恩 我是在做克隆，可是我要建库，几个是绝对不行的，必须要最少要500多才行，那是最少的。
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10楼2011-12-22 08:36:59
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