24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 1379  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

索索00

铁虫 (小有名气)

[求助] 蓝斑和白斑都有带,为什么呢 急。

我现在的疑问是:我对我的对照组进行了质粒提取检测,发现篮板和白色菌落都有带还很亮,有图片,第一个是原来的质粒,后面四个是长得菌落,前面两个是蓝斑,后面是百菌落,按理说,用一个环状的质粒做转化的话,他不应该有带的,可是现在,,,,,什么原因,还请各位帮忙分析下,谢谢啦!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-22 18:28:03
你用的是特异引物吧,转化时质粒用量较高,质粒涂在平板上,PCR可以扩增30亿倍,也就是说你挑点培养基也可以P出带来。有两种办法:1,用载体通用引物P;2,用2ml管摇菌后再PCR。
生命不息,探索不止。
5楼2011-12-19 20:03:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

longrna

新虫 (正式写手)

用环状的质粒做转化不应该有带? 不是很明白什么意思。
楼主可以把整个实验说清楚一些,还有质粒是什么质粒,菌落PCR是怎么P的之类...
伟大航线....
2楼2011-12-19 09:20:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-22 18:27:18
PCR假阳性,所以单做PCR是不行的,还要酶切验证!
原因:1 可能是质粒并没有完全转化到细菌中去,而是吸附在表面。2 可能是细菌基因组内有引物结合位点
真相是最大的奢侈品
3楼2011-12-19 09:35:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-12-22 18:27:38
这是质粒图还是PCR结果?要是质粒图,你的蓝白斑都阴性,要是PCR鉴定的结果,还是对质粒双酶切看看吧,PCR鉴定的假阳性都很多,PCR结果不可信,可能是PCR污染导致的!
大家共同交流、共同提高!!!
4楼2011-12-19 18:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见