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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒单酶切之后比原始质粒变小了！！！？？
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513279618

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒单酶切之后比原始质粒变小了！！！？？

质粒分别单酶切之后，跑胶发现比原始质粒变小了！！如果是存在两个酶切位点，把质粒切成了两条相等的片段，但从分子量计算又不对。
可是如果进行双酶切，还能切下目的带。本人实在困惑。求各位高手指点！！！！
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1楼2011-10-28 10:05:44
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-10-28 13:09:24
质粒跑胶会有3条带
即跑最前边的是超螺旋状态的质粒，中间的是螺旋状态的质粒，泳动速度最慢线型质粒DNA。
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2楼2011-10-28 10:41:49
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-10-28 19:15:48
质粒电泳的大小没参考价值，不用管，一般看质粒大小都是单酶切线性化后

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2011-10-28 11:23:31
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流！ 2011-10-28 19:15:55
同上，质粒的电泳大小看看就行了，线性化质粒电泳结果可能还有些参考价值。
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4楼2011-10-28 13:18:15
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豆豆鱼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

单酶切后，质粒变为线形，相对没切的质粒电泳速度会有变化，如楼上所说，参考价值不大，只要能双酶切开，应该就没什么问题~
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5楼2011-10-28 20:56:27
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lihegang2000

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我估计你的胶浓度在1.5%以上，浓度越大，超螺旋的质粒跑得越慢
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6楼2011-10-29 11:52:38
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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~祝顺利！ 2011-10-30 10:59:03
和原始质粒比较没意义，看来楼主是新手，看看原始质粒跑电泳的性质吧。要想真的看大小就选择一个质粒上唯一的酶切位点单酶切线性化，然后跑胶看条带大小，这才是真正质粒大小。
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7楼2011-10-29 22:40:10
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xuexue1992

新虫 (初入文坛)
我也遇到同样问题，请问楼主最后是如何解决的，十分感谢！
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8楼2015-03-31 21:27:56
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