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marc0907

金虫 (小有名气)


[交流] 毛细管电泳分离ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal

各位gg,jj,
      小弟想通过毛细管电泳分离onp、ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal这四种物质,如何分离,小弟曾尝试了一下,用的条件是pH2.5 磷酸buffer,电压20KV,在214nm下检测紫外吸收,但不幸的是,小弟跑了45分钟也未见有峰出现,不知是什么原因。是不是要在buffer 里面加入硼酸和SDS后回好一些,另外ph调高一些是不是不会好一些!请大家不吝赐教,小弟在此不胜感激!btw,不知道大家用的内标物是什么!我看文献用的是pnp-acetate!
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marc0907

金虫 (小有名气)


给力啊!顶起!
2楼2011-12-15 08:41:39
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阿斯楞

银虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
在你的电泳条件下onp、ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal 4种待分析物,无法电离,不会带有净电荷,无法实现分离,本来应该和电渗流一起流出,但你使用的buffer 的pH是2.5,此时电渗流又非常之小(如果你pH调的有些偏差,可能小于2.5,那电渗流会更小),所以导致你45min内没看到色谱峰。试试下面的方法:
1.使用10mM硼砂buffer,pH11或11.5,看看这样的pH能否使苯环上的糖中的羟基解离(这个我不太确定,所以得你自己试试)。
2.如果1不行,只能试试MECC了,用含50mMSDS的pH9.0的硼砂缓冲液试试。
3.如果1、2都不行,用含160mM SDS的pH2.0的磷酸缓冲液,但是一定要翻转电压。就是要从负极进样,使用负电压运行。至于原理我不在此解释,如果实验能做出来,自己看书弄清楚原理。
祝你好运
4楼2011-12-30 09:48:32
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marc09073楼
2011-12-19 10:57   回复  
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