24小时热门版块排行榜

返回列表

marc0907

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1156.8
帖子: 153
在线: 16.4小时
虫号: 896136

[交流] 毛细管电泳分离ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal

各位gg，jj，
小弟想通过毛细管电泳分离onp、ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal这四种物质，如何分离

，小弟曾尝试了一下，用的条件是pH2.5 磷酸buffer，电压20KV，在214nm下检测紫外吸收，但不幸的

是，小弟跑了45分钟也未见有峰出现，不知是什么原因。是不是要在buffer 里面加入硼酸和SDS后回好一些，另外ph调高一些是不是不会好一些！请大家不吝赐教，小弟在此不胜感激

！btw

，不知道大家用的内标物是什么！我看文献用的是pnp-acetate！

回复此楼

» 猜你喜欢

申博自荐 2篇一区TOP+1篇EI+2公开发明专利 2027博士申请已经有3人回复
越来越担心硕士毕业后没有竞争力了已经有12人回复
闲聊已经有6人回复
申博求助已经有4人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-12-14 11:13:44

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

marc0907

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1156.8
帖子: 153
在线: 16.4小时
虫号: 896136

给力啊！顶起！

回复此楼

2楼2011-12-15 08:41:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

阿斯楞

银虫 (小有名气)

应助: 14 (小学生)
金币: 31.2
帖子: 202
在线: 77.5小时
虫号: 595072

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

在你的电泳条件下onp、ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal 4种待分析物，无法电离，不会带有净电荷，无法实现分离，本来应该和电渗流一起流出，但你使用的buffer 的pH是2.5，此时电渗流又非常之小（如果你pH调的有些偏差，可能小于2.5，那电渗流会更小），所以导致你45min内没看到色谱峰。试试下面的方法：
1.使用10mM硼砂buffer，pH11或11.5，看看这样的pH能否使苯环上的糖中的羟基解离（这个我不太确定，所以得你自己试试）。
2.如果1不行，只能试试MECC了，用含50mMSDS的pH9.0的硼砂缓冲液试试。
3.如果1、2都不行，用含160mM SDS的pH2.0的磷酸缓冲液，但是一定要翻转电压。就是要从负极进样，使用负电压运行。至于原理我不在此解释，如果实验能做出来，自己看书弄清楚原理。
祝你好运