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marc0907

金虫 (小有名气)

[交流] 毛细管电泳分离ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal

各位gg，jj，
      小弟想通过毛细管电泳分离onp、ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal这四种物质，如何分离，小弟曾尝试了一下，用的条件是pH2.5 磷酸buffer，电压20KV，在214nm下检测紫外吸收，但不幸的是，小弟跑了45分钟也未见有峰出现，不知是什么原因。是不是要在buffer 里面加入硼酸和SDS后回好一些，另外ph调高一些是不是不会好一些！请大家不吝赐教，小弟在此不胜感激！btw，不知道大家用的内标物是什么！我看文献用的是pnp-acetate！
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1楼2011-12-14 11:13:44
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阿斯楞

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
在你的电泳条件下onp、ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal 4种待分析物，无法电离，不会带有净电荷，无法实现分离，本来应该和电渗流一起流出，但你使用的buffer 的pH是2.5，此时电渗流又非常之小（如果你pH调的有些偏差，可能小于2.5，那电渗流会更小），所以导致你45min内没看到色谱峰。试试下面的方法：
1.使用10mM硼砂buffer，pH11或11.5，看看这样的pH能否使苯环上的糖中的羟基解离（这个我不太确定，所以得你自己试试）。
2.如果1不行，只能试试MECC了，用含50mMSDS的pH9.0的硼砂缓冲液试试。
3.如果1、2都不行，用含160mM SDS的pH2.0的磷酸缓冲液，但是一定要翻转电压。就是要从负极进样，使用负电压运行。至于原理我不在此解释，如果实验能做出来，自己看书弄清楚原理。
祝你好运
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4楼2011-12-30 09:48:32
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