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zhangdapeng

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助】毛细管电泳DNA峰拖尾

请问大家在做毛细管电泳实验时有没有遇到下面问题,发现DNA出峰随着做实验次数的增加,其峰拖尾的越来越厉害,这是什么原因?是分离缓冲液时间用长了吗?
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

zhangdapeng(金币+2):谢谢! 2010-08-11 15:48:22
楼主用的什么检测器?如果是紫外,可能是您的DNA浓度过高了,需要把管子好好洗洗。
另外,不知道楼主用的是什么缓冲体系,有没有在体系中加点多羟基醇类化合物,如甘露醇等。
七窍通了六窍
2楼2010-08-10 22:05:19
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zhangdapeng

木虫 (著名写手)

我使用的是激光诱导荧光检测,DNA的浓度只有2nM,应该不是浓度很高的原因,因为我用的内标以及DNA和蛋白生成的复合物的峰高和峰面积都很稳定,就是DNA越做到后面就拖尾的很厉害,因此峰面积会越来越多!
3楼2010-08-11 15:52:22
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

zhangdapeng(金币+1):谢谢! 2010-08-12 10:08:38
好好洗洗管子再试试看。
七窍通了六窍
4楼2010-08-12 01:24:29
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zhangdapeng

木虫 (著名写手)

我每次进样前都用20mMNaOH冲洗2min,水冲洗1.5min,电泳缓冲液冲洗3min
5楼2010-08-12 10:10:22
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mengtiehong

铁虫 (小有名气)

呵呵,谢谢分享啊
6楼2010-08-12 14:04:39
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qianfan

金虫 (正式写手)

我觉得吧,估计是DNA多少有点吸附,多做几次后就拖尾严重,不同次进样中间的冲洗好一点再试下看
7楼2010-08-12 18:24:14
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