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水水726

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】毛细管电泳的几个问题已有3人参与

请教几个毛细管电泳的问题:缓冲液选择原则是什么?分析物质偏酸性碱性或中性时,分别选择什么样的缓冲液?为什么?峰形保留时间不好或出峰情况不好时,该怎么调整??谢谢各位指教!
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通

★ ★ ★
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happy169(金币+2, ACI+1):thanks! 2010-07-20 15:31:06
一般首先优化buffer的pH,最常使用的是磷酸盐缓冲体系,但是磷酸盐缓冲体系需要较长的平衡时间,然后优化离子强度,还有添加剂等条件;酸性物质在高pH下会带有负电荷,在高pH下,EOF指向阴极,因此可以加速被测物质的出峰,所以一般首选碱性buffer进行实验,不过酸性物质也可以在中性或偏酸性的buffer中得到分离;中性物质在分离时必须依靠电渗流,因此buffer的pH最好能高于3.5。峰形不好的原因很多,需要具体问题具体分析。保留时间不稳定一般是因为没有平衡好capillary所造成的,可以增大平衡时间。还有电压要选择好!
七窍通了六窍
2楼2010-07-19 22:08:31
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ghy2099

铜虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by platto at 2010-07-19 22:08:31:
一般首先优化buffer的pH,最常使用的是磷酸盐缓冲体系,但是磷酸盐缓冲体系需要较长的平衡时间,然后优化离子强度,还有添加剂等条件;酸性物质在高pH下会带有负电荷,在高pH下,EOF指向阴极,因此可以加速被测物 ...

弱弱的问一下,EOF是什么?为什么是指向阴极的呢?
3楼2010-07-20 10:19:50
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platto

木虫 (著名写手)

一窍不通


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
EOF是电渗流的意思。是指在电场的作用下,毛细管内的buffer的定向流动。楼主可以看看相关书籍。
七窍通了六窍
4楼2010-07-20 11:45:56
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阿斯楞

银虫 (小有名气)

如果使用的CZE模式,考虑到样品要带有效电荷,那么碱性的选低pH缓冲液,此时样品带正电荷;酸性的选高pH缓冲液,此时样品带负电荷。中性样品同时不宜使用CZE模式,应选用MECC,当然碱性和酸性样品从增加分离选择性角度考虑,有很多时候也选用MECC。CE重现性是制约其发展的硬伤,不同样品,提高重现性的方法不尽相同,比如对于水溶性特别不好的样品,在背景电介质中加入有机溶剂重现性会有所改善。
5楼2010-07-21 09:32:32
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