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关于毛细管电泳的问题
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我新手，想请问一下： 1、在毛细管电泳文献中，在电泳条件下经常出现“在压力20psi冲洗”。这个20psi怎么计算出来的？有公式吗？谢谢。 2、在做胶束毛细管电泳时，配制缓冲溶液。如：“50 mM H3PO4，100 mM SDS 和 12 % (v/v) THF， pH值为2.5。”这个是先定容还是先调PH值？有机溶剂是什么时候加入的？换句话说，你们在配制此缓冲时都是怎样配制的？谢谢。 |
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kandelia0101
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2楼2011-12-28 15:53:46
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408851978(金币+2): 常来看看啊 2011-12-30 09:33:37
408851978(金币+2): 常来看看啊 2011-12-30 09:33:37
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1.对于国外公司生产的CE，以 Agilent HP3D capillary electrophoresis为例，冲洗时只需选择Flush，冲洗会自动进行，显示压力是900mbar，1psi大约等于68mbar，换算过来不到14psi（实际上这个值就是个经验值，没必要特别准确，10-20psi应该都可以）。对于国内生产的CE仪器，冲洗时就用弹簧推着医用注射器（注射器里抽进碱、水、缓冲液等等）对毛细管进行冲洗，根本不知道冲洗压力是多大。我问过厂家的人，他们也清楚，好像有人粗测过，应该在12psi左右。 2.对简单的缓冲液，比如20mM pH4.0的磷酸缓冲液、10mM pH9.0的硼砂缓冲液等，你可以直接称量一定量的磷酸盐或硼砂，定容到一定的体积即可，至于称多少，书上有表自己看。对于稍微复杂些的，就得先调pH在定容了，当然，调好pH的溶液体积和你需要定容体积不能相差太大，这个需要些经验。以你说的“50 mM H3PO4，100 mM SDS 和 12 % (v/v) THF”为例，比如，这个buffer要配25ml，你算好配25ml的这个buffer需要 H3PO4，SDS 和 THF各多少（我们通常是配个高浓度的储备液，然后去一定的体积），放到小烧杯里（25ml），然后通常要加些水（加多少需要经验，保证调好后不超过25ml），搅拌、调pH、定容。OK |
3楼2011-12-30 09:30:08
408851978
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4楼2011-12-30 09:38:33
