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hsjcy314

金虫 (正式写手)

[求助] 关于毛细管电泳的问题

我新手,想请问一下:
1、在毛细管电泳文献中,在电泳条件下经常出现“在压力20psi冲洗”。这个20psi怎么计算出来的?有公式吗?谢谢。
2、在做胶束毛细管电泳时,配制缓冲溶液。如:“50 mM H3PO4,100 mM SDS 和 12 % (v/v) THF, pH值为2.5。”这个是先定容还是先调PH值?有机溶剂是什么时候加入的?换句话说,你们在配制此缓冲时都是怎样配制的?谢谢。
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kandelia0101

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1. 这个压力只是个经验值,冲洗毛细管一般就是用10~20psi
2.先将pH调到需要值(缓冲容量合适的缓冲体系的pH随浓度的变化可以忽略不计),然后定容
2楼2011-12-28 15:53:46
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阿斯楞

银虫 (小有名气)

★ ★
408851978(金币+2): 常来看看啊 2011-12-30 09:33:37
1.对于国外公司生产的CE,以 Agilent HP3D capillary electrophoresis为例,冲洗时只需选择Flush,冲洗会自动进行,显示压力是900mbar,1psi大约等于68mbar,换算过来不到14psi(实际上这个值就是个经验值,没必要特别准确,10-20psi应该都可以)。对于国内生产的CE仪器,冲洗时就用弹簧推着医用注射器(注射器里抽进碱、水、缓冲液等等)对毛细管进行冲洗,根本不知道冲洗压力是多大。我问过厂家的人,他们也清楚,好像有人粗测过,应该在12psi左右。
2.对简单的缓冲液,比如20mM pH4.0的磷酸缓冲液、10mM pH9.0的硼砂缓冲液等,你可以直接称量一定量的磷酸盐或硼砂,定容到一定的体积即可,至于称多少,书上有表自己看。对于稍微复杂些的,就得先调pH在定容了,当然,调好pH的溶液体积和你需要定容体积不能相差太大,这个需要些经验。以你说的“50 mM H3PO4,100 mM SDS 和 12 % (v/v) THF”为例,比如,这个buffer要配25ml,你算好配25ml的这个buffer需要 H3PO4,SDS 和 THF各多少(我们通常是配个高浓度的储备液,然后去一定的体积),放到小烧杯里(25ml),然后通常要加些水(加多少需要经验,保证调好后不超过25ml),搅拌、调pH、定容。OK
3楼2011-12-30 09:30:08
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408851978

木虫 (著名写手)

道圣

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般是先调节酸碱度啊
奋斗是金!
4楼2011-12-30 09:38:33
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