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marc0907

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[交流] 毛细管电泳分离ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal

各位gg，jj，
小弟想通过毛细管电泳分离onp、ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal这四种物质，如何分离

，小弟曾尝试了一下，用的条件是pH2.5 磷酸buffer，电压20KV，在214nm下检测紫外吸收，但不幸的

是，小弟跑了45分钟也未见有峰出现，不知是什么原因。是不是要在buffer 里面加入硼酸和SDS后回好一些，另外ph调高一些是不是不会好一些！请大家不吝赐教，小弟在此不胜感激

！btw

，不知道大家用的内标物是什么！我看文献用的是pnp-acetate！

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1楼2011-12-14 11:13:44

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marc0907

金虫 (小有名气)

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给力啊！顶起！

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2楼2011-12-15 08:41:39

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阿斯楞

银虫 (小有名气)

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★
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在你的电泳条件下onp、ONPG、ONPG-Gal、ONPG-Gal-Gal 4种待分析物，无法电离，不会带有净电荷，无法实现分离，本来应该和电渗流一起流出，但你使用的buffer 的pH是2.5，此时电渗流又非常之小（如果你pH调的有些偏差，可能小于2.5，那电渗流会更小），所以导致你45min内没看到色谱峰。试试下面的方法：
1.使用10mM硼砂buffer，pH11或11.5，看看这样的pH能否使苯环上的糖中的羟基解离（这个我不太确定，所以得你自己试试）。
2.如果1不行，只能试试MECC了，用含50mMSDS的pH9.0的硼砂缓冲液试试。
3.如果1、2都不行，用含160mM SDS的pH2.0的磷酸缓冲液，但是一定要翻转电压。就是要从负极进样，使用负电压运行。至于原理我不在此解释，如果实验能做出来，自己看书弄清楚原理。
祝你好运