24小时热门版块排行榜    

查看: 2146  |  回复: 25

305554991

新虫 (初入文坛)

我也碰过,后来换了一个试剂盒就好了,试试TOYOBO的反转录试剂盒50次的600元。
21楼2010-08-04 17:13:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-04 17:03:51:



cDNA里这个基因的富集度不高,引物特异性体系和条件是很重要的

请问您有什么好的建议吗?
22楼2010-08-07 20:12:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzp55zzp

新虫 (初入文坛)

首先,你要验证引物适用性和最佳的退火温度,验引物适用性,先用软件测试吧,再用阳性质粒中做温度梯度,确定最佳退火温度,这个对你最后的方法验证也是很有必须的。然后验证转录出cDNA质量和浓度。有没有转录出cDNA?目的片段是否完整?这两个问题解决了,最后做方法验证,这样你的实验结果才是可靠并且可重复的。
23楼2010-08-09 10:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpu2004

金虫 (小有名气)

linxi8579(金币+2): 2010-08-11 10:13:58
可能逆转录达不到你的长度,MLV受RNA二级结构的影响相对大一些,虽然MLV扩增长度更长但是打开二级结构的能力不如AMV,AMV逆转3kd也是足够了,你可以试试。
另外你设计一个到你polyA端大概在500bp左右的特异性上游引物,和你的下游引物做一次PCR,如果它能P出来说明肯定是逆转录达不到你要的长度。
24楼2010-08-09 11:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-07 20:12:21:

请问您有什么好的建议吗?

引物就是之前说过的,提高所提取RNA的质量
25楼2010-08-10 13:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by cpu2004 at 2010-08-09 11:11:22:
可能逆转录达不到你的长度,MLV受RNA二级结构的影响相对大一些,虽然MLV扩增长度更长但是打开二级结构的能力不如AMV,AMV逆转3kd也是足够了,你可以试试。
另外你设计一个到你polyA端大概在500bp左右的特异性上游 ...

恩,谢谢你啦。
26楼2010-08-11 10:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linxi8579 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +50 医学老男孩 2026-08-13 108/5400 2026-08-18 16:49 by eulota
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +8 yuleib84 2026-08-18 9/450 2026-08-18 16:33 by 撸猫猫
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +7 基诺咪客 2026-08-17 10/500 2026-08-18 16:24 by Lullabygxb
[基金申请] 明天放榜? +4 Shxjjxjkx 2026-08-18 4/200 2026-08-18 15:59 by abcabc1133
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 8/400 2026-08-18 11:47 by gltch
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见