24小时热门版块排行榜    

查看: 1887  |  回复: 25

305554991

新虫 (初入文坛)

我也碰过,后来换了一个试剂盒就好了,试试TOYOBO的反转录试剂盒50次的600元。
21楼2010-08-04 17:13:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-04 17:03:51:



cDNA里这个基因的富集度不高,引物特异性体系和条件是很重要的

请问您有什么好的建议吗?
22楼2010-08-07 20:12:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzp55zzp

新虫 (初入文坛)

首先,你要验证引物适用性和最佳的退火温度,验引物适用性,先用软件测试吧,再用阳性质粒中做温度梯度,确定最佳退火温度,这个对你最后的方法验证也是很有必须的。然后验证转录出cDNA质量和浓度。有没有转录出cDNA?目的片段是否完整?这两个问题解决了,最后做方法验证,这样你的实验结果才是可靠并且可重复的。
23楼2010-08-09 10:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpu2004

金虫 (小有名气)

linxi8579(金币+2): 2010-08-11 10:13:58
可能逆转录达不到你的长度,MLV受RNA二级结构的影响相对大一些,虽然MLV扩增长度更长但是打开二级结构的能力不如AMV,AMV逆转3kd也是足够了,你可以试试。
另外你设计一个到你polyA端大概在500bp左右的特异性上游引物,和你的下游引物做一次PCR,如果它能P出来说明肯定是逆转录达不到你要的长度。
24楼2010-08-09 11:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-07 20:12:21:

请问您有什么好的建议吗?

引物就是之前说过的,提高所提取RNA的质量
25楼2010-08-10 13:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by cpu2004 at 2010-08-09 11:11:22:
可能逆转录达不到你的长度,MLV受RNA二级结构的影响相对大一些,虽然MLV扩增长度更长但是打开二级结构的能力不如AMV,AMV逆转3kd也是足够了,你可以试试。
另外你设计一个到你polyA端大概在500bp左右的特异性上游 ...

恩,谢谢你啦。
26楼2010-08-11 10:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linxi8579 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +8 调剂的考研学生 2026-03-09 8/400 2026-03-15 22:14 by Winj1e
[文学芳草园] 伙伴们,祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +3 腻腻gk 2026-03-14 3/150 2026-03-15 17:28 by 小物理化学
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 313分生物学求调剂 +6 Yyt杨1 2026-03-09 8/400 2026-03-14 03:00 by JourneyLucky
[考研] 295复试调剂 +5 简木ChuFront 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:29 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕,一志愿中国矿业大学,总分314,求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 26考研调剂 +3 ying123. 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:18 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交大,材料专硕317求调剂 +5 lx8568 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:43 by peike
[考研] (081700)化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿山东大学,总分327,英语二79,有论文,有竞赛,已过四六级 +3 木木目目1 2026-03-09 3/150 2026-03-09 19:52 by yuningshan
信息提示
请填处理意见