应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RT-PCR不成功
263/3返回列表上一页123
查看: 1766  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

305554991

新虫 (初入文坛)
我也碰过，后来换了一个试剂盒就好了，试试TOYOBO的反转录试剂盒50次的600元。
赞一下 回复此楼
21楼2010-08-04 17:13:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by shuiyue2728 at 2010-08-04 17:03:51:



cDNA里这个基因的富集度不高，引物特异性体系和条件是很重要的

请问您有什么好的建议吗？
赞一下 回复此楼
22楼2010-08-07 20:12:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zzp55zzp

新虫 (初入文坛)
首先，你要验证引物适用性和最佳的退火温度，验引物适用性，先用软件测试吧，再用阳性质粒中做温度梯度，确定最佳退火温度，这个对你最后的方法验证也是很有必须的。然后验证转录出cDNA质量和浓度。有没有转录出cDNA？目的片段是否完整？这两个问题解决了，最后做方法验证，这样你的实验结果才是可靠并且可重复的。
赞一下 回复此楼
23楼2010-08-09 10:41:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cpu2004

金虫 (小有名气)
linxi8579(金币+2): 2010-08-11 10:13:58
可能逆转录达不到你的长度，MLV受RNA二级结构的影响相对大一些，虽然MLV扩增长度更长但是打开二级结构的能力不如AMV，AMV逆转3kd也是足够了，你可以试试。
另外你设计一个到你polyA端大概在500bp左右的特异性上游引物，和你的下游引物做一次PCR，如果它能P出来说明肯定是逆转录达不到你要的长度。
赞一下 回复此楼
24楼2010-08-09 11:11:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shuiyue2728

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by linxi8579 at 2010-08-07 20:12:21:

请问您有什么好的建议吗？

引物就是之前说过的，提高所提取RNA的质量
赞一下 回复此楼
25楼2010-08-10 13:11:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxi8579

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cpu2004 at 2010-08-09 11:11:22:
可能逆转录达不到你的长度，MLV受RNA二级结构的影响相对大一些，虽然MLV扩增长度更长但是打开二级结构的能力不如AMV，AMV逆转3kd也是足够了，你可以试试。
另外你设计一个到你polyA端大概在500bp左右的特异性上游 ...

恩，谢谢你啦。
回复此楼
26楼2010-08-11 10:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 linxi8579 的主题更新
263/3返回列表上一页123
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭