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linxi8579

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】RT-PCR不成功 已有12人参与

最近想做真菌里一个基因的异源表达,可是反转出来的CDNA老是扩不出带来,DNA为模板的能够扩出来。但是用tublin(100多bp)引物扩CDNA能扩出来。我的目的基因大小在3000多bp,高手指点一下吧!
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cpu2004

金虫 (小有名气)

linxi8579(金币+2): 2010-08-11 10:13:58
可能逆转录达不到你的长度,MLV受RNA二级结构的影响相对大一些,虽然MLV扩增长度更长但是打开二级结构的能力不如AMV,AMV逆转3kd也是足够了,你可以试试。
另外你设计一个到你polyA端大概在500bp左右的特异性上游引物,和你的下游引物做一次PCR,如果它能P出来说明肯定是逆转录达不到你要的长度。
24楼2010-08-09 11:11:22
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