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linxi8579

铜虫 (正式写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 3983.2
散金: 87
帖子: 473
在线: 51.8小时
虫号: 620942
注册: 2008-10-09
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

[交流] 【求助/交流】RT-PCR不成功已有12人参与

最近想做真菌里一个基因的异源表达，可是反转出来的CDNA老是扩不出带来，DNA为模板的能够扩出来。但是用tublin（100多bp）引物扩CDNA能扩出来。我的目的基因大小在3000多bp，高手指点一下吧!

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1楼 2010-08-02 20:29:09

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zzp55zzp

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 82
帖子: 6
在线: 1.1小时
虫号: 338293
注册: 2007-04-04
专业: 生物技术

首先，你要验证引物适用性和最佳的退火温度，验引物适用性，先用软件测试吧，再用阳性质粒中做温度梯度，确定最佳退火温度，这个对你最后的方法验证也是很有必须的。然后验证转录出cDNA质量和浓度。有没有转录出cDNA？目的片段是否完整？这两个问题解决了，最后做方法验证，这样你的实验结果才是可靠并且可重复的。