Originally posted by wkl1984 at 2011-05-04 10:06:25:
扩增条件为  预变性45° 30min,PCR扩增94° 15s ,60° 30s,72° 1min,40个循环，终延伸为72°1min。反应体系为ddH2o 19微升，2×RT-PCR Buffer 25微升，AMV Rt/taq Mix 1微升，随机六聚体引物 2微升，模板DNA  ...

Originally posted by wkl1984 at 2011-05-04 10:06:25:
扩增条件为  预变性45° 30min,PCR扩增94° 15s ,60° 30s,72° 1min,40个循环，终延伸为72°1min。反应体系为ddH2o 19微升，2×RT-PCR Buffer 25微升，AMV Rt/taq Mix 1微升，随机六聚体引物 2微升，模板DNA  ...

Originally posted by 新人小玥 at 2011-05-05 21:40:27:
为什么用随机六碱基为引物？RT-PCR不是应该使用特异性引物吗？随机六碱基只有在反转录的时候才用到呀。

Originally posted by 新人小玥 at 2011-05-05 21:40:27:
为什么用随机六碱基为引物？RT-PCR不是应该使用特异性引物吗？随机六碱基只有在反转录的时候才用到呀。

Originally posted by 西瓜 at 2011-05-05 22:02:13:
楼主用的是一步法，即反转录和PCR两个反应都在同一个管子里完成。但是他这里没有加特异引物呢……

Originally posted by wkl1984 at 2011-05-06 09:44:00:
是啊，我用的是一步反转录，只是扩增时没有得到大约在400-500bp的序列

Originally posted by 新人小玥 at 2011-05-06 13:19:48:
没有特异引物，怎么会扩出来呢？
我没有用过一步法，但是想想都不会有特异条带出来呀。

Originally posted by wkl1984 at 2011-05-06 15:18:32:
我对这个的理解不是很透彻，但是文献上涌随机六聚体引物，九聚体引物和Olig dT等引物扩增，那么扩增的条带有很多，然后再经过第二次PCR扩增，筛选出了具体想要的片段，主要见于构建cDNA文库，抗体文库等。