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wkl1984

金虫 (小有名气)

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[求助] ＲＴ－ＰＣＲ问题求助

做反转录，按照生工的AMV一步反转录试剂盒的具体内容操作，但是试剂盒不建议用随机六聚体引物扩增，我正好用随机六聚体引物扩增了，扩增的结果如下，1为1000kb的marker，2 为ＲＴ－ＰＣＲ产物，marker好像有问题。扩增条件为预变性45° 30min,PCR扩增94° 15s ,60° 30s,72° 1min,40个循环，终延伸为72°1min。另外，模板ＤＮＡ的量加了3微升，总模板DNA小余1微克。其余按照试剂盒操作。特异性差一点，请大家给出建议

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1楼2011-04-30 22:51:03

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西瓜

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【答案】应助回帖

引用回帖:

Originally posted by wkl1984 at 2011-05-04 10:06:25:
扩增条件为预变性45° 30min,PCR扩增94° 15s ,60° 30s,72° 1min,40个循环，终延伸为72°1min。反应体系为ddH2o 19微升，2×RT-PCR Buffer 25微升，AMV Rt/taq Mix 1微升，随机六聚体引物 2微升，模板DNA ...

我是没用过一步法的试剂盒，但是，你的体系里没有基因特异的引物啊，怎么能扩增出特定的基因呢？