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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ＲＴ－ＰＣＲ问题求助
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wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] ＲＴ－ＰＣＲ问题求助

做反转录，按照生工的AMV一步反转录试剂盒的具体内容操作，但是试剂盒不建议用随机六聚体引物扩增，我正好用随机六聚体引物扩增了，扩增的结果如下，1为1000kb的marker，2 为ＲＴ－ＰＣＲ产物，marker好像有问题。扩增条件为  预变性45° 30min,PCR扩增94° 15s ,60° 30s,72° 1min,40个循环，终延伸为72°1min。另外，模板ＤＮＡ的量加了3微升，总模板DNA小余1微克。其余按照试剂盒操作。特异性差一点，请大家给出建议
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1楼 2011-04-30 22:51:03
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vinatone

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 热心鼓励 2011-05-06 08:45:37
用touchdownPCR试试，不行就换引物
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14楼2011-05-05 23:54:00
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