应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】RT-real time pcr问题
71/1返回列表
查看: 2446  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

chendarid0

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】RT-real time pcr问题 已有2人参与

我是新手 请高手不吝赐教
我是做β微管蛋白基因的相对基因表达差异，以β-ACTIN为内参基因，在前面的RT-PCR中我得到的rna是否可以不用电泳鉴定就直接可以用于后面的cDNA转录，因为电泳槽经常跑DNA，我担心rna鉴定时被降解
在荧光定量pcr之前我要用得到的cDNA分别以β微管蛋白基因引物和β-ACTIN内参基因引物来进行pcr扩增，以检测cDNA是否搞出来了，如果我摸索出了他们的较佳的pcr反应条件那我以后是否就可以省略这步直接在荧光定量pcr上来进行相对定量pcr检测  
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
三人行必有我师
1楼 2010-08-23 14:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafang68

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-08-23 20:58:47
RNA降解是因为RNA酶的存在，跟你的电泳槽跑DNA无关。
你检测CDNA时只跑actin即可；  摸索出RT-PCTR条件后，可直接省略此步骤。
其实，你验证的仅是你逆转的CDNA质量如何。
赞一下(2人) 回复此楼
木虫啦，哈哈
2楼2010-08-23 15:09:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-23 15:09:31:
RNA降解是因为RNA酶的存在，跟你的电泳槽跑DNA无关。
你检测CDNA时只跑actin即可；  摸索出RT-PCTR条件后，可直接省略此步骤。
其实，你验证的仅是你逆转的CDNA质量如何。

谢这位高手。你的意思是必须进行rna电泳鉴定。那我进行rna电泳鉴定时电泳槽可以不用DEPC水洗，可以不用新胶和新缓冲液吗？我看到好像有人用甲醛的凝胶电泳，而且电泳槽还要用酸还是碱洗（我好像有点忘了），过氧水洗，还得高温烘干，好像太费事了

摸索出rt-pcr条件后我省略此步普通pcr那我的cDNA怎么保证质量可以呢
谢谢
赞一下 回复此楼
三人行必有我师
3楼2010-08-23 15:35:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafang68

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):热心 2010-08-24 09:19:25
呵呵，你理解错了，我的意思是不用进行RNA鉴定。我们提的次数多了，直接逆转CDNA后跑RT-PCR。就看你提RNA的水平能不能过关了
赞一下(2人) 回复此楼
木虫啦，哈哈
4楼2010-08-23 20:43:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-23 20:43:30:
呵呵，你理解错了，我的意思是不用进行RNA鉴定。我们提的次数多了，直接逆转CDNA后跑RT-PCR。就看你提RNA的水平能不能过关了

谢谢你的指点，你的意思是rna电泳鉴定可以省略，但是得到的每个cDNA都要以actin引物来进行普通pcr鉴定，没有问题再进行荧光定量pcr
赞一下 回复此楼
三人行必有我师
5楼2010-08-24 08:58:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mafang68

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+1):谢谢分享。 2010-08-25 09:44:16
呵呵，也不是。只要你能确保你提的RNA质量好，不必用普通PCR来验证，直接跑RT-PCR即可。所以，你需要的就是多联系RNA提取技术
赞一下(2人) 回复此楼
木虫啦，哈哈
6楼2010-08-24 20:50:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chendarid0

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by mafang68 at 2010-08-24 20:50:39:
呵呵，也不是。只要你能确保你提的RNA质量好，不必用普通PCR来验证，直接跑RT-PCR即可。所以，你需要的就是多联系RNA提取技术

谢谢你的指点
回复此楼
三人行必有我师
7楼2010-08-25 08:34:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chendarid0 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 7K1CJE38xLG4 2026-08-25 4/200 2026-08-26 02:04 by cNXvBfCpiZOM
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 7K1CJE38xLG4 2026-08-25 4/200 2026-08-26 02:04 by cNXvBfCpiZOM
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +17 木水思豆 2026-08-25 20/1000 2026-08-26 01:26 by chengyan1220
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 19/950 2026-08-25 17:57 by chick875
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +20 羊腰板 2026-08-21 23/1150 2026-08-25 16:34 by zsna
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 22/1100 2026-08-25 15:36 by 医学老男孩
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +5 process2012 2026-08-23 7/350 2026-08-25 09:42 by huixian257
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +17 kkkl_v 2026-08-19 18/900 2026-08-25 09:41 by windflowerwy
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +7 炎黄贵胄 2026-08-22 8/400 2026-08-25 08:48 by ZJTJZ
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +25 yaoyewhu2008 2026-08-20 27/1350 2026-08-25 08:01 by Equinoxhua
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤？
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭