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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】求助关于实时定量PCR

各位兄弟姐妹，
我做某miRNA的定量PCR，前段时间效果一直很好。不知为什么这两次做的融解曲线的峰（纵坐标为荧光值）都要比原来低很多，原来的峰基本上和内参U6的峰一样高，但现在基本上只有之前的一半。请教这是怎么回事？所有的条件都是一样的。

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1楼 2011-02-21 20:42:46

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sutao1979

木虫 (著名写手)

★
xuehu2008(金币+1):谢谢参与
xuehu2008(金币+2): 2011-02-22 10:49:33

检查一下fluorescent dye是否有问题，这些都是要避光的

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3楼2011-02-22 02:05:25

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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

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dye一直是避光保存的，没有什么变化啊。

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4楼2011-02-22 10:50:11

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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

★ ★
xuehu2008(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-02-22 14:51:49
xuehu2008(金币+2): 2011-02-22 14:58:26

染料问题，买的试剂盒？
不过不影响结果
结果很好

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5楼2011-02-22 12:24:29

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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

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是promega的试剂盒，不过若是染料问题，那U6为什么正常？

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6楼2011-02-22 14:59:14

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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励 2011-02-22 18:22:14

引用回帖:

Originally posted by xuehu2008 at 2011-02-22 06:59:14:
是promega的试剂盒，不过若是染料问题，那U6为什么正常？

如果这是一批的话，还要看你的扩增曲线，把图片发上来看看

荧光值降低可能是试剂盒的扩增效率降低，这样对于高丰度的模板影响不大，而对于低丰度的模板则会影响较大

或者模板有降解，原理同上

还有，比如你的引物加少了，自然就荧光值低了，当然，我想这种可能性应该不大

总之，荧光值降低表示你的染料出了问题或者终产物减少

如你所述，那就应该是后者

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7楼2011-02-22 16:28:09

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