版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

返回列表

xuehu2008

铜虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 244.5
帖子: 487
在线: 100小时
虫号: 570440

[交流] 【求助/交流】求助关于实时定量PCR

各位兄弟姐妹，
我做某miRNA的定量PCR，前段时间效果一直很好。不知为什么这两次做的融解曲线的峰（纵坐标为荧光值）都要比原来低很多，原来的峰基本上和内参U6的峰一样高，但现在基本上只有之前的一半。请教这是怎么回事？所有的条件都是一样的。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

【求助】几个关于实时定量PCR的问题已经有12人回复
【求助/交流】荧光定量PCR与半定量的RT－PCR在设计引物时有什么区别？已经有8人回复
【求助/交流】荧光定量pcr求助已经有11人回复
【求助/交流】求助，关于荧光定量PCR问题已经有5人回复
【求助/交流】关于做荧光定量pcr的模板问题已经有12人回复
【求助/交流】关于qrt pcr 已经有8人回复
【求助/交流】实时荧光定量pcr的问题已经有7人回复
求助交流荧光定量PCR基线偏下已经有5人回复
【求助/交流】荧光定量pcr 已经有11人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2011-02-21 20:42:46

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

★
xuehu2008(金币+1):谢谢参与
xuehu2008(金币+2): 2011-02-22 10:49:33

检查一下fluorescent dye是否有问题，这些都是要避光的

赞一下(1人)

回复此楼

3楼2011-02-22 02:05:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xuehu2008

铜虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 244.5
帖子: 487
在线: 100小时
虫号: 570440

dye一直是避光保存的，没有什么变化啊。

赞一下

回复此楼

4楼2011-02-22 10:50:11

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

★ ★
xuehu2008(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流 2011-02-22 14:51:49
xuehu2008(金币+2): 2011-02-22 14:58:26

染料问题，买的试剂盒？
不过不影响结果
结果很好

赞一下(2人)

回复此楼

5楼2011-02-22 12:24:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xuehu2008

铜虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 244.5
帖子: 487
在线: 100小时
虫号: 570440

是promega的试剂盒，不过若是染料问题，那U6为什么正常？

赞一下

回复此楼

6楼2011-02-22 14:59:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励 2011-02-22 18:22:14

引用回帖:

Originally posted by xuehu2008 at 2011-02-22 06:59:14:
是promega的试剂盒，不过若是染料问题，那U6为什么正常？

如果这是一批的话，还要看你的扩增曲线，把图片发上来看看

荧光值降低可能是试剂盒的扩增效率降低，这样对于高丰度的模板影响不大，而对于低丰度的模板则会影响较大

或者模板有降解，原理同上

还有，比如你的引物加少了，自然就荧光值低了，当然，我想这种可能性应该不大

总之，荧光值降低表示你的染料出了问题或者终产物减少

如你所述，那就应该是后者

赞一下(1人)

回复此楼

7楼2011-02-22 16:28:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖